162200. lajstromszámú szabadalom • Eljárás L-glutamináz előállítására
162200 9 10 4. példa Dúsított L-glutamináz előállítása 2-m.etilpentán-2,4-diollal való kiesapással 321,2 g nyers glutaminázt, melynek aktivitása 4,2 E/mg, feloldunk 6,4 liter m /i 5 eitrátpuffer-oldatban (pH = 5,0), 20 000 g-vel centrifugálva derítjük az oldatot, és lassú keveréssel összekeverjük 6,4 liter 2-metilpentán-2,4-diollal. A képződött üledéket percenként 3000 fordulattal lecentrifugáljuk, acetonnal mossuk, majd megszárítjuk. Termelés: 44,0 g; E/mg = koztatott termelési hányad: 21,0 Az E-re vonat-68%. 5. példa Nyers glutamináz előállítása polietilénglíkollal való kicsapással. 5,0 g sejttömeget, melynek hatóanyag-tartalma 1,6 E/mg, 100 ml foszfátpuffer-oldatban (pH = 7,5) szuszpendálunk, a szuszpenziót szobahőmérsékleten 2 órán át keverjük és 20 000 gvel centrifugáljuk. A felülúszó oldathoz 150 ml 50%-os, vizes polietilénglikol-oldatot (molekulasúly = 1550) adunk, és egy óra múlva lecentrifugáljuk az üledéket. Ezt az üledéket acetonnal mossuk, majd megszárítjuk. Termelés: 0,564 g; E/mg = 8,0 Az E-re vonatkoztatott termelési hányad: 56%. 6. példa A dúsított L-glutamináz finom frakcionálása a) 6,7 g L-glutaminázt, melynek aktivitása 21 E/mg, 134 ml m / 15 fosizfát-pufferoldatban (pH = 7,5) feloldunk, az oldatot 20 000 g-vel centrifugálva derítjük, majd 50%-os, vizes polietilénglikol-oldatot (molekulasúly = 1550) adunk hozzá. A képződött üledéket lecentrifugáljuk, acetonnal mossuk, majd megszárítjuk. Ezt a frakciót A-val jelöljük. A felülúszó oldatból a fenti módon kapjuk a B- és a C-frakciót. Az alábbi táblázatban láthatók a mennyiségi adatok. +J O o cö <=~ "N T3 O cö •M >» cö 5 M cö 5 X O A -o o 2 -1) -4) TI os o) 46 o M cö o 2 0> a v 5P BJO s a CÖ fa PUi o EH S H w < £ 30 35 40 45 50 55 60 A B C 0— 67 210 67— 80 199 80—120 3250 16,3 22,5 27,2 3 425 4 480 88 400 2,43 3,18 62,70 b) 1 g L-glutaminázt, melynek aktivitása 27,2 E/mg, feloldunk 20 ml borát-pufferoldatban (pH = 8,7), az oldatot 20 000 g-vel centrifugálva derítjük, majd 2-metil-peni tán-2,4-diollal az a) pontban leírt módon frakcionáljuk. A mennyiségi arányok az alábbi táblázatban láthatók. 10 15 20 25 o O •ö B s^ i a •cö a CÖ a -es ö a •ac M O 43 -o ö a •0) 1) •tí cö u cö g <1> 6 a cö w l CL) fa g N irt fa IM k H fa fa < £ A 0--ilO 47 14,0 658 2,4 B 10— •14 290 8,1 2370 8,7 C 14--18 377 13,7 5160 19,0 D 18— •25 48 112,0 5380 19,8 7. példa A nyers L-glutamináz frakcionálása a) 478,5 g sejttömeget, melynek hatóanyagtartalma 2,15 E/mg, a 6b. példában leírt módon 9,5 liter m / 1 5 citrát-pufferoldatban (pH = 5,0) szuszpendálunk, majd extraháljuk és centrifugáljuk. 8,2 liter felülúszó oldatot kapunk, melyet a 6b. példában leírt eljárással analóg módon 2,5--hexándiollal frakcionálunk. Az alábbi táblázaton láthatók a mennyiségi arányok. M o cö C T3 M M O 43 C -cu > « ;0 °Ö cö -cö 0) 43 i m 'di <1) bJD S cö a cö w o 1 CL) « g "3 írt fa <N EH w fa <5 5 A 0— 6150 70,5 0,83 58 515 5,69 B 6 150—: L0 250 34,7 9,20 319 000 31,1 C 10 250—: 14 350 32,2 4,00 128 000 12,5 b) 30,0 g L-glutaminázt, melynek aktivitása 9,2 E/mg, feloldunk 600 ml m / 15 citrát-pufferoldatban, az oldatot 20 000 g-vel centrifugálva derítjük, majd a 6a. példában leírt eljárással analóg módon frakcionáljuk 50%-os polietilénglikol-oldattal. A mennyiségi 65 szemlélteti: adatokat az alábbi táblázat 5
