162171. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a szérum kalciumtartalom csökkentésére képes hormonszerű szer előállítására

9 162171 10 hasonló összetételű konyhasóoldatban neveljük. Az 1. ábra az 1:1 arányban higitott tengervizben való nevelés (napokban kifejezett) időtartama, a szérum-kalciumtartalom, és a szérum ozmózis nyomása közötti összefüggést szemlélteti. Mind a szérum-kalciumtartalom, mind az ozmózis nyomás az 5. napig no, majd csökkenni kezd. Mint a 2. ábrán látható, a hatóanyagnak a mint E/szekréciós szövet kifejezett hatáserőssége a szérum-kalciumtartalomnál ős az ozmózis nyomásnál lassabban, 10-15.napon éri el a maximumát, majd csökkenni kezd. így tehát a nevelést addig célszerű folytatni, amig a calcitonin-tartalom eléri a maximális értéket és akkor kell az angolna testéből kihámozni a A folyékony kivonat azonban szennyezésként különböző fehérjéket tartalmaz, ezért célszerű a folyadékot tovább tisztitani és az emiitett fehérjéket eltávolítani. A fehérjék eltávolítása történhet ugy is, hogy közvetlenül a fenti kivonatból csapatjuk ki őket, és a kicsapott fehérjékkel együtt az extraktumban levő egyéb s zilárd s zennyező anyagokat is eltávolítjuk. Ugy is eljárhatunk, hogy a szilárd szennyező anyagoktól előzetesen megtisztított extraktumból távolítjuk el a fehérjéket. A szilárd s zennyező anyagok eltávolítása után a fenti poralaku nyersterméket e tisztitási műveletnek vetjük alá. E célra valamely a szétválasztásra és a fehérjéktől való megtisztításra általánosan használt módszert alkalmazhaúuik. 2. Az extrahálás A fenti nyersanyagokat előzetesen extraháljuk. Oldószerként viz és valamely hidrofil szerves oldószer, pl. 1-4 szénatomos alkohol, aceton,fenol dioxán, piridin, tetrahidrofurán, metil-celloszolv, dimetil-formamid dimetilszulfoxid stb. elegyét használjuk. Használhatunk valamely híg savat is, pl. sósavat, ecetsavat, oxálsavat stb. vagy vizet. E vizes oldószerek bármely arányban tartalmazhatnak vizet. Célszerű ezekhez az oldószerekhez (általában 4-8 mól) karbamidot elegyíteni. Továbbá előnyös redukálószereket, pl. cisztint vagy C-vitamint oldani ezekben az oldószerekben az extrakció közben végbemenő oxidáció megakadályozása céljából. Különösen előnyös a 8 mól karbamidot tartalmazó 0,2 n sósavas 0,1 n cisztinoldat. Extrahálás céljából elegendő a nyersanyagot szobahőmérsékleten a fenti oldószer elegy be önteni és az elegyet keverni. szekréciós szövetet. A nevelés időtartama előnyösen 10-17 nap, de az angolnák között van egyedi eltérés. A nyelőcső falához kötődött vena cava-t magában foglaló, a szívhez közeli szövetet és a szivburokhártyát kihámoztuk olyan angolnákból, amelyeket tengervizben, vagy sós vízben neveltünk, vagy nem így neveltünk, és meghatároztuk a hatóértéket E/szekréciós szövet-ben, E/testsuly kgban, és E/fehérje-nitrogéntartalomban kifejezve. Az alábbi táblázaton foglaltukössze az eredményeket. A táblázat adatai alapján látható, hogy ha az angolnákat tengervizben vagy ahhoz hasonló koncentrációjú konyhasó-oldatban neveltük, a hatáserősség minden esetben a 2-szeresére, vagya 3-szorosára nőtt. 3. A tisztítás Az e kivonatból az oldhatatlan szilárd anyagok, azaz a nyersanyagban levő sejtelemek eltávolítása után kapott folyékony kivonatot csökkentett nyomáson besűrítjük, majd liofilizáljuk, ős így poralaku nyersterméket kapunk. A szennyező anyagként jelenlevő fehérjék kicsapása céljából a fenti folyékony kivonathoz hidrofil szerves oldószereket, pl. valamely 1-4 szénatomos alkoholt, acetont, fenolt, dioxánt, piridint, tetrahidr of uránt, metilcelloszolvot, dimetilformamidot, dimetilszulfoxidot stb. elegyítünk. A fenti folyékony kivonatokhoz valamely szervetlen sót, pl. nátriumkloridot, ammóniums-zulfátot stb. is adhatunk. Ha a fenti folyékony kivonathoz triklórecetsavat vagy perklórsavat adunk, olyan csapadékot kapunk, amely zömébén az izolálandó hatóanyagból áll. Ha ezt a csapadékot vízben diszpergáljuk, az izolálandó hatóanyag vízben feloldódik. Ha az oldatból az oldhatatlan anyagokat eltávolítjuk, a hatóanyagot a tisztítás előtti állapotához képest 2-szerte — 5-szörte tisztább állapotbankapjuk. Ha igen alacsony pH-értékü vizet használunk, a fehérjeszennyezések feloldódnak, és az nem kívánatos. Ha a pH-érték igen magas, a hatóanyagban levő diszulfid-kötés labilissá válik. Tehát a víz kémhatását a különböző szennyező fehérjék eltávolítása céljából 5,0 ős 7,0 közötti pH értőkre, előnyösen pH 6-ra kell beállítani. A nyers hatóanyagból a fehérjeszennyezéseket eltávolíthatjuk a Sephadex vagy a Biogel néven forgalombahozott készítményeken való gélfiltrálással, továbbá ioncserélő Sephadex-en vagy ioncserélő cellulózon való kromatografálással. 10 15 időtart 30 35 40 45 50 55 60 65 MRC mE/fehérje-MRC E/szövet MRC mE/mg nitrogén (y) (Folin-módszer) édesvíz 2,2-4,1 8,0-29,8 1,6- 5,2 1/2 tengervíz 6,6-9,2 29,7-53,0 7,6-11,5 1/3 tengervíz 5,8-9,0 30,1-51,2 8,1-12,3 (a nevelési időtartam: 13 nap) 5