162064. lajstromszámú szabadalom • Eljárás oxigénfunkció mikrobiológiai bevitelére a 3-dezoxiandrosztének és 3-dezoxi-androsztadiének 3-helyzetébe
162064 kultúrával kezelijiük. A fermentálást 1,0—100, előnyösen 30—60 óra múlva megszakítjuk és a képződött vegyületet az ismert módon elválasztjuk és izoláljuk. A z)3 -3-idezoxwCi9-'Szteroidok esetében az oxigénfunkciónak a 3-helyzetbe történő bevitelét Corynebacterium törzsekkel érjük el, amikoris egyidejűleg a kettőskötés a /J3 -helyzetből a A''-helyzetbe izomerizálódik. Így pl. a zl3 -androsztén-17-on z)4 -androsztén-^3,17-dionná és a A3 ^-androsztadién-iÍ7 -on zf 4-6 -androsztadién-3,17-dionná alakul át. Egy z)4 -kettőskÖ;tés előfordulása esetén az oxigénfunkciónak a 3-helyzetbe való bevitele Streptomyces fajokkal történik. Így pl. a Ä 1--androszténHl7-on a találmány szerint alakítható át /d4-iandrosztén-í3^17Mdionná. A találmány szerinti eljárás a 3-hidroxi-, ill. 3-oxo-Ci9-szteroidok előállításának új útját nyitja meg, különösen a biológiailag fontos zl4^3--ketocsoportot tartalmazó vegyületekét. Az eljárás egyszerű módon, egy lépésben megy végbe és jól reprodukálható. Az eljárás alkalmazásának különösen akkor van jelentősége, amikor a /I^S-ketoosaport kémiai úton történő beépítése a szteroid-hormonok és szteroid-jellegű gyógyszerek szintézise során nehézségekbe ütközik vagy nem gazdaságos. A találmány szerinti eljárást az alábbi kiviteli példákban közelebbről szemléltetjük. 1. példa: 20 db 500 cm3 -es állólombikba egyenként 50 cm3 tápoldatot (10 g dextróz, 10 g pépton bakt., 10 cm3 kazeinhidrolizátum, 2 g élesztőextraktum, 6 g NaCl, — vízzel 1000 cm3 -re kiegészítve) viszünk be és ezt Streptomyces species IMET Í09 1.1—(13 napos ferde zabliszt^agaron 28 °C-on tenyésztett kultúrájának szuszpenziójával oltjuk ,be. A továibbi tenyésztés t körrázóasztalon 28 °C-on történik. Ehhez a" -kultúrához 48 óra múlva összesen 100 mg zí4 ^androsztén-17--ont adunk acetonban oldva és további 48 óráig rázzuk. Ezután az egész kultúrát éterrel többször extraháljuk, az éteres oldatot n NaOH-oldattal és desztillált vízzel mossuk, szárítjuk és az étert ledesztilláljuk. A kristályos maradékot vékonyrétegkromatográifiával szilifcagélen (Kieselgel D, Greiz—Dölan) fluoreszcens indikátor hozzáadásával 2:3 arányú benzol-éter futtatórendszerrel tisztítjuk. Az UV-pozitív sávot végül éter-kloroform 1 :1 arányú keverékével eluáljuk. Az eluátum besűrítése után a zl4-androsztén-,3,fli7^dion kristályosan kiválik. Hozam ,40«/«,, op. 17,2 °C; [a]D ==+185° ,(CHC1 3 ); lmax = = 241 tun, (C2H 5 OH). 2. példa: 20 db 500 cm3 -es állólombikba egyenként 50 cm tápoldatot (10 g dextróz, 10 g pepton bakt., 10 cm! kazeinhidrolizátum, 2 g élesztőextraktum, 6 g NaCl, vízzel 1000 cm3 -re kiegészítve) viszünk be és ezt Corynebacterium spec. SG 985 37 °C-on húsleves-agáron 2% glicerinnel tenyésztett 48 órás ferde kultúrájának szusz-5 penziójával oltjuk be. A további tenyésztés 37 cC-on történik körrázóasztalqix. Ehhez a kultúrához 48 óra múlva összesen 100 mg 5<wl3 -androsztén-47-on 10 cm3 1 :,3 arányú kloroíorm-aceton eleggyel készített oldatát adjuk és 10 további 72 óráig rázzuk. Ezután az egész kultúrát metilénkloriddal többször extraháljuk, a szerves fázist 0,1 n NaOH-oWattal és desztillált' vízzel mossuk, szárítjuk és vákuumban bepároljuk. A nyers extraktumot oszlopkromatográ-15 fiásan 0,2—0,5 mm-es szilikagélen (Kieselgel— Merck) tisztítjuk. A finom tisztítás vékonyrétegkromatográfiásán 1 ihm vastag szilikagél (Kieselgel G, Merck) rétegen fluoreszcens indikátor jelenlétében benzol-éter i(2 :3) futtatószerrel 20 történik. Az UV-pozitív sávot 1 :1 arányú éter-klorofonm eleggyel eluáljuk. Az eluátum besűrítése után a J4 -androsztén-347-dion kristályosan kiválik. Op. .172 °C; [u]D = +»185 °C (CHC13 ). 25 3. példa: i20 db 500 cm3 -es állólombikba egyenként 50 30 cm3 tápoldatot '(10 g dextróz, 10 g pepton bakt., 10 cm3 kazeinhidrolizátum, 2 g keményítőextraktum, 6 g NaCl, vízzel 1000 cm3 -re kiegészítve) viszünk be és ezt Corynebacterium spec. SO 1093 28 °C-on húsleves-agáron 20/Q, glicerinnel 35 tenyésztett 48 órás ferde kultúrájának szuszpenziojával oltjuk be. A további tenyésztés 28 °C^on körrázóasztalon történik. Ehhez a kultúrához 48 óra múlva összesen ,100 mg zJ3,5 -androsztadién-il7-on 10 cm3 1 : 3 arányú kloroform-40 -aceton eleggyel készített oldatát adjuk és további 144—19.2 órát rázzuk. Ezután az egész kultúrát éterrel többször extraháljuk, az éteres oldatot 0,1 n NaOH-oldattal és desztillált vízzel mossuk, szárítjuk és beparolj.uk . A nyers 45 extraktum tisztítása az 1. példában leírtnak megfelelően történik. UV pozitív termékként a ^4 ' 6 -androsztadién-347Hdiont izoláljuk. Op. 170 °C; [a]D = +138° , (OHCI3); W=282 nm (C2H5OH). 50 Szabadalmi igénypontok: il. Eljárás oxigénfunkció mikrobiológiai be-35 vitelére a 3ndezoxi^androsztének és 3-dezoxi-androsztadiének molekulájának ,3-helyzetébe, aerob mikroorganizmus-kultúrákkal ismert tenyésztési körülmények között lefolytatott fermentáció útján, azzal jellemezve, hogy a ki-60 Lnduló 3-dezoxi-ándrosztén-, illetőleg 3-dezoxi-androsztadién-származékot vízzel elegyedő szerves oldószerben, célszerűen acetonban oldjuk és Corynebacterium spec, vagy Streptomyces spec, törzsekkel kezeljük, a fermentációt 10—íl00, 65 előnyösen 30—60 óra múlva megszakítjuk és a 2
