162046. lajstromszámú szabadalom • Eljárás mikroorganizmusok tisztítására

162046 9 10 A mikroorganizmus oldószeres extraháiása előtt előnyösen legalább 20 s%> célszerűen 100— 200 s% vizet tartalmaz .(száraz tiszta é'-3szto .súlyra számítva). Szükség esetén az élesztő extrahálás előtt 5 vízzel keverhető. A víznek az összes alkoholhoz és az azeotrópot alkotó szénhidrogénhez való aránya az extrakci'ós művelet lépésében vagy lépéseiben vagy az első extrakciós művelet után ,1 :4 és 10 1 : 10 súlyarány közé esik. Ha kívánjuk, a fent leírt extrakció megismételhető; előnyösen víznek az élesztőhöz adása után, hogy annyi legyen a víztartalma, mint az első műveletben. 15 Az extrahált fázisban oldószeres extrahálással kapott szénhidrogéneket, ha azok a mikroorganizmius számára metabolizálhatók, visszavezethetjük a mikroorganizmust tenyésztő műveletbe. 20 Az oldószeres extrakcióval kapott, vizet és az oldószerből álló vagy azt tartalmazó elpárologtatható anyagot tartalmazó mikroorganizmus tartalmú anyagot tovább kezeljük a fent' leírt módon az elpárologtatható anyag teljes vagy 25 részleges eltávolítására. A fent leírt módszerek szerint a lipidjeitől és a szennyező szénhidrogénektől mentesített élesztő új ipari termék. 30 A találmány egyik előnyös ífoganatosítási módja szerint egy mikroorganizmust tenyésztünk a fentebb leírt módon egy részben egyeneslánoú szénhidrogénekből álló, molekulánként legalább 10 szénatomnak megfelelő köze- 35 pes molekulasúlyú ásványolaj párlat és egy vizes tápanyag, továbbá szabad oxigént tartalmazó gáz jelenlétében, majd a kapott keverékből elkülönítjük egyrészt a mikroorganizmust, másrészt egy kevesebb egyenesláncú szénhidrogént 40 tartalmazó vagy attól mentes ásványolajfrakciót, és a mikroorganizmust a fent leírt módon kezeljük. Az ismertetett eljárás Ibármelyik művelete, több, mint egy művelete vagy valamennyi mű- 45 velete végrehajtható akár szakaszosan, akár folytonos üzemben. Szénhidrogén szubsztrátumon tenyésztett mikroorganizmusoknak a termék szénihidrogéntar- 50 talmától való elkülönítésére alkalmazott oldószeres extrakciója után az oldószert eddig, például a 152 49:5 számú magyar és az 1 049 083 és 1049 067 számú brit szabadalom leírásának példáiban említett módon, bepárlással, előnyösen 55 csökkentett nyomás alatt, célszerűen iners gázáramban vagy túlihevített vízgőz áramban távolították el a mikroorganizmus mellől, nem ismerve fel a termék víztartalma részleges megtartásának a bevezetőben vázolt jelentőségét az 60 elpárologtatható anyag {oldószer) tökéletes eltávolíthatósága szempontjából. A mikroorganizmusok tenyésztésére és a termék kinyerésére alkalmas módszerek leírása található a 152 495, 1821638, 152 696, 1,521817, 65 15,2 818, 152 819, 152 049, 152 950 és 152 951 számú magyar és 1 017 584, 1 021 697, 1 021 698, 1 049 033, 1 049 067, 1 059 881, 1 059 882, 1 059 889 és 1 059 890 számú brit szabadalmi leírásokban. Az alábbi példák szemléltetik az eljárás gyakorlati végrehajtását, anélkül azonban, hogy a szabadalom terjedelmét ezekre kívánnánk korlátozni. 1. példa: A következő összetételű 40 liter vizes szervetlen táptalajt betöltöttük egy 60 liter befogadóképességű rozsdamentes acél fermentorba: diammóniumfoszfát káliumklorid magnéziumszulfát • 7 H2O cinkszulíát mangánszulfát • 4 H2O vasi(II)szulfát élesztőkivonat vízvezetéki víz desztillált vízzel kiegészítve g 2 1,15 0,65 g . 0,17 g 0,068 g 0,1124 g 0,030 g 200 g 1000 ml-re 20 liter olyan oltóanyagot, amelyet Candida lipolyticá-nak C10—C20 normál szénihidrogének keverékén való 24 órás tenyésztésével kaptunk, és amely literenként kb. 1 g száraz sejtanyagot tartalmazott, adtunk a táptalajhoz. Ezután 1,030 liter (15 g/liter) nehéz gázolajat adtunk hozzá, mire a sej tanyag-tartalom 2 g/ /literre nőtt. A tenyészet hőmérsékletét a fermentor köpenyében keringtetett vízzel 30 ±1 °C-on tartottuk. A levegőztetést és a keverést úgy szabályoztuk, hogy a levegőzés üteme percenként 3 mmol O2 volt 1 liter közegre számítva. A pH-t automatikus pH-szabályozó rendszer segítségével adagolt ammónia-oldattal 4 értéken tartottuk. Amikor a bevezetett ammónia menynyisége elérte a 20 ml-t, megindítottuk a gázolaj hozzáadását. Az olaj adatai a következő voltak: fajsúly dermedés pont iforrásköz 0,i870 +16 °C 300-1390 °C A hozzáadás ütemét a tenyészet elméleti szükséglete alapján állapítottuk meg, feltételezve, betáplált száraz élesztő hogy a hozam = 10 s%, betáplált gázolaj a sejtosztódási idő pedig 3 óra. Az olaj hozzáadását óránként addig folytattuk, amíg a gázolaj teljes mennyisége 200 g/litert, azaz 13,8 litert el nem ért. 2 g/liter .sejtsűrűséggel kezdve a 25. órában (az exponenciális növekedési szakasz végén) a sejtsűrűség 15 g/liter lett. 5