162027. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vérnyomáscsökkentő hatású vegyület előállítására
162027 13 14 leuca-foól) hozzáadunk 500 ml-es lombikba mért 60 ml 2,0% glükózt és 0,6% szárított élesztőt tartalmazó táptalajhoz és 120 °C-on 20 percig sterilizáljuk. A tenyészetet 14 napon át 27 °C-on inikubáljuk. Mindegyik edénybe 5 250 ml 2,0% glükózt és 0,50/0 szárított élesztőt tartalmazó tápoldatot -aduink, majd rázatjuk és ily módon a négy lombikból kapott szuszpenzióval oltjuk be a íementart.. A 400 literes rozsdamentes acél fermentorba bemé- 1° rünk 150.1 tápoldatot, mely 2,0% glükózt, 0,5% peptont, 0,3% szárított élesztőt, 0,3%, ikáliumdihidrogénfosztfátot, 0,1% MgSÖ4 • 7H 2 0-t tartalmaz, 20 percen át 120 °C-on sterilizáljuk, majd az előbbiekben kapott szuszpenzió-te- 15 nyészettel ibeoltjuk. A fermentációt 200 ford ./perc keverési sebességgel és 150 1/peic steril levegő bevezetésével 27 °C^on folytatjuk. Az oldat kezdeti pH-ja 5,iS8; a 45. órában 5,1; az 55. órában 4,i6; a 65. órában 4,35; a 83. 20 órában 4,8; a 96. órában 4,7. A redukáló cukor fokozatosan csokikén és a 96. órában értéke 0,53/%.. A tápoldat szürletében az udenon mennyisége a köetkező: a 40. órában 19.5 mcg/ml; a 65. órában 91 mcg/ml; a 71. órában 25 94 mcg/ml és a 80. órában 605 mcg/ml. A féíjrtentációval a 97. érában leállunk, a tápoldatot sósavval pH 3,0-ra állítjuk be, szűrjük és ágy 1,10 1 szürletét kapunk. A szurlet 607 meg/ml udenont tartalmaz. A 4,1 kg nedves 30 micélium-szűrőlepény i2,0 g udenont tartalmaz. Az _ előbbi módon kapott szürlethez 100 1 n-butanolt adunk, összekeverjük és elválasztjuk, majd ismét 50 1 n-butanolt adunk a szűilethez. A butamolos extraiktumokat egyesítjük 35 (végső térfogat I166 1, mely 49,8 g udenont tartalmaz), majd csökkentett nyomáson desztillálva szirup sűrűségűre be töményítjük. Az így kapott szirupot 800 ml benzol-etilaioetát i(2 :1 térfogat) keverékében oldjuk és az oldatot 4 cm 40 átmérőjű szüdkagéHel töltött kolonnán vezetjük át (I,i85 kg szilikágélt szuszpendálunk toenzol^etilaeetát elegyben). Ezután az Oszlopon előbb 6 1 benzol-etilacetát (2 : 1) 'elegyet, majd 6 1 benzol-etilacetát (1 ; 1) elegyet és 'végül 30 1 45 benzol-etilacetát (1 :2) elegyet vezetünk át. Ilyen módon 28,6 g (1100 mcg/ml) udenont tartalmazó oldatot kapunk. Az eíuátumot csökkentett nyomáson desztillálva, kfo. 40 g mennyiségre töményítjük be. Az így kapott szirup- 50 sűrűségű anyagot 3 1 iforró hexánba adva, lehűlés után 17 g udenon kristályosodik kL Az udenon ainyalűgjából még további 8 g udenon kristályosodik ki., 55 Az előbbi módon kapott, udenont tartalmazó mioélium-szűrőlepényt 8 1 metanollal extraiháljuk és az exteaktumot csökkentett nyomáson végzett idesztülációvál 1,5 l-re betöményítjük. Az oldatot sósavval pH 3,Q-ra állítjuk be és 60 1,5 1, majd 0,75 1 n-butamoUal extraháljuk. Az egyesített butanolos extraktumokat szirup sűrűségűre betöményítjük, a szirupot 100 ml benzol-etilacetát (,2 :1) elegyben oldjuk, majd 120 g sziafcagélt tartalmazó kolonnán vezetjük 65 át. Az előbbiekben leírt módon végezve az anyag elkülönítését, 1,0 g udenont kapunk. 2. példa: Az udenont termelő törzs micélium szuszpenzióját az 1. példában leírt módon készítjük el, vagyis a 10F törzs fűrészporos táptalajon végzett tenyésztésével. 10 ml szuszpenzióyal beoltunk ,500 ml^as lombikba mért 125 ml tápoldatot, mely 2,0% glükózt, 0,5% peptont, 0,3% szárított élesztőt, Ö,i3% kálium-dihidrogénfoszfátot, 0,1% MigS04-i7H20-t tartalmaz és 11 napon át 27 °C-Hon rázatva tenyésztjük. Ilyen módon 1O0Ű ml fermentlevet kapunk .'(310 meg/ /ml), melyet IRA—'400 (Rohm & Haas,, USA) gyantával töltött oszlopon vezetünk át. A 2 em átmérőjű kolonnába 50 ml klorid-formájú ioncserélő gyantát helyezünk. Az oszlopon előbb 100 ml desztillált vizet, majd .350 ml 0,1 ,n sósavat vezetünk át. Az eluátum 260 mg udenont tartalmaz, melyet előbb 350 ml, majd 100 ml 'n-butanolt adagolva, extraháljuk.. A ibeinzolos extraktumot csökkentett nyomáson desztillálva szirupot kapunk. A szirupot benzolban oldj.uk, majd hexán hozzáadásával az udenont kicsapjuk. Ilyen módon 150 írig kristályos udenont kapunk. 3. példa: A 10F törzset az ,1. példáiban leírt módon tenyésztjük. A fermentációt a 9i6. órában fejezzük be. A tfermentlé 500 mcg/ml udenont és a micélduimas szűrőlepény SO mcg/ml udenont tartalmaz. A 100 1 fermentlevet sósavval pH 2,5-re állítjuk be és előbb 100 ml,. majd 50 1 n-butanollal extraiháljuk. Az egyesített butanölos extraiktumokat — mely 62 g udenont tartalmaz — csökkentett (nyomáson végzett desztillációval szirup sűrűségűre töményítjük be. A sziiruipból az udenont előbb 4 liter, majd 1 liter etilacetát hozzáadásával extraháljuk. Az egyesített etilacetátas oldatot 1,6 1 vízre öntjük, keverés közben a vizes réteget 10 n nátironlúggal pH 7,0-ra állítjuk be, majd a vizes réteget elválasztjuk. A vizes fázis 41 g .uderiont tartalmaz. A vizes réteget sósavval pH 3y0-tfa állítjuk be és az udenomt előbb.3 liter,, majd I liter etilacetáttal extraháljuk. Az etilacetátos fázisokat egyesítjük és szirup sűrűségűre pároljuk. A szirupot 3 liter hexánban oldjuk, majd hűtjük. Ily (triódon 18 g Kristályos udenont kapunk és az attiyalúg beti5ményítésével további II g kristályos udenon különíthető el/ 4. példa: 5,Q ml 0,02 mól udenon-oldathoz (4,17 mg/ /ml) 17 °C-on 0,02 mól rézszuMát oldatot csepegtetünk. Ily módon az udenon kék színű rézsója csapódik ki. A legtöbb csapadékot akkor kapjuk, ha az oldathoz 2,45—3,0 ml 0,02 mól rézszuK-át oldatot adunk. A ifelülúszó anyag 2,08 7
