162027. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vérnyomáscsökkentő hatású vegyület előállítására
szacharóz: a hetedik napon 14 meg/ml, a tizedik napon 15 mcg/ml és -\—h; glicerin: a hetedik napon 19 mcg/ml, a tizedik napon 016 meg/ml és +H—h; nátrium-acetát: a hetedik és tizedik napon 5 kevesebb, mint 5 meg/ml, a tizenötödik napon 18 mcg/íml és +. . Az .udenon termelésére szénfornásként és habzásgátló-szerként növényi olajok, mint szó- 10 jabab-olaj, szezám-olaj, stb. és állati zsírok, mint dizsinózsírból préselt olaj, stb. alkalmazható. Az udenon szén, hidrogén és oxigén elemeket tartalmaz, de nitrogént nem. Az udenont termelő törzs termesztésére azonban 15 olyan nitrogéntartalmú anyagokat alkalmazunk, amelyek felhasználása a mikroorganizmusok szaporításainál ismert. így például az udenont termelő törzs termesztésére pepton, hús-kivonat, élesztő, élesztőkivonat, szójabab- 20 liszt, gyapotmag-liszt, földimogyoró-liszt, ku.koricalekvár, rizskoirpa és szervetlen (nitrogéntartalmú anyagok alkalmazhatók. Udenont állítottunk elő udenont termelő 25 törzs razókultúrájával például a következő tápoldatokban: Á) tápoldat 2,0%, glükózt, 0,5% peptont, 0,3% KH2 F0 4 -t és 0,1% MgS0 4 • 7H 2 0-t 30 tartalmaz l(a pH-t nem állítottuk . be) B) tápoldat 2,0% glükózt és 1,0%. kukoíicalekváirt tartalmaz <pH 5^6) 35 C> tápoldat 2,0%: glükózt, 1,0%, szójabab-lisztet és 0,5% szárított élesztőt tartalmaz i(pH 5,6). .40 Mindegyik tápoldat 125 milliliterét beöntjük egynegy 500 ml-es lombikba és az oldatokat az előbbi módon fűrészporos táptalajon szaporított udenont termelő törzzsel beoltjuk. Az oldat pH-nja és az udenon termelése a kö- 45 vetkező: napok A) tápoldat B) tápoldat C) tápoldat száma pH mcg/ml pH mcg/ml pH mcg/ml 50 6 szükséges •— kis mennyiségű nehézfémsók ih-.::. záadása is lehetséges.' . Udenon fermentációval végzett előállítására az antibiotikumok előállításánál alkalmazott fermentációs eljárások használhatók, pl. rázókultúrával, vagy szubmeirz • levegőztetett fermentációval, melyhez habzásgátló szereket, mint növényi olajokat, állati zsírokat, vagy szilikon gyantát adunk. . Az udenon meghatározható a tirozin-hidroxiláz működését gátló aktivitás kimutatásával. A vizsgálati módszert a Journal of Antibiotics 21, 350—1352 oldal (1988) írja le. Udenon meghatározására a jelen találmány tárgyát képező spektrofotometriás módszer a következő: a vizsgálandó udenon oldatot 1/15 mól pH 7,0 foszfát-pufférrel hígítjuk (hígítás n), optikai sűrűségi i(a), a hígított oldatot 1 cm-es küvettában 246 ny hullámhosszon olvassuk le; a vizsgálandó udenon oldatot 0,1. n sósav oldattal hígítjuk (hígítás n), optikai sűrűség (b), az oldatot 1, cm-es küvettáfoan 246 m/« hullámhosszán olvassuk le. Az udenon nienynyiséget az oldatban a. következő képlettel számítjuk: (a — b)n 1000 — 60 X 10 4 — nnog/ml udenon lAmennyiben az udenont termelő törzset fo-. lyékohy táptalajban tenyésztjük, akkor az udenon a férmentlé folyadék- és szilárd-részében egyaránt megtalálható. így. például, ha az udenont termelő törzset 2,0% glükózt és 0,5% peptont tartalmazó irázott-tenyészetben tenyésztjük i(125 ml tápoldat, 500 ml-es lombikban), majd az udenont az oldatban és a szilárd részben meghatározzuk, akkor 10 iml fermeritlében az udenon mennyisége a következő ((udenont a szilárd részből metanolos extrakoiócióval különítjük el és* spektrofotoimetriás módszerrel határozzuk meg):•-''Napok meg udenen meg udenon Q szüárd • az •oldatban részben 5 4.4 11 4,8 5 4.4 15 7 4.4 5 4.4 12 .4.4 64 8 4.4 11 4.8 29 4.4 8.8 11 4.4 62 4.16 100 5.0 95 12 4.8 158 5.0 215 4.8 229 15 5.2 íao 5.2 255 5.6 475 5 3712 185 • 7 045 . 365 8 1300 410 11 2180 342 A táblázatból látható, hogy az udenon termesztésére a pepton, a kukoirücalekvár, a szójababliszt és a szárított élesztő alkalmas hitrogénforrás. Az udenon termesztésére nitrogénforrásként alkalmazható még a földimogyoróliszt, gyapotmag-liszt, kazein és a kazein-hidrolizátum is. Szervetlen sók — és amennyiben 60 65 A találmány szerint megállapítottuk, hogy az udenon vízben, metanolban, etanolban, butanolban, etilacetátban, butilacetáhban, kloroformban és benzolban oldódik, továbbá, hogy vizes oldatból az udenon vízzel nem keveredő oldószerbe, mint butanolba, etilaeetátba, butilacetátba, kloiroformba és benzolba kirázható. A mégha táirozott megoszlási együtthatók a következők: 3
