161985. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a terminális aminocsoportjukon szubsztituált szekretinszármazékok előállítására
161985 6 itrifluorecetsavat vákuumban eltávolítjuk, és étert hozzáadva teljessé tesszük a kicsapódást. Az így kapott trífluoracetátot 0,005 n ammóniumacetáitoldatiban oldjuk, és az oldatot 0,005 n aimmóniumacetát-oldattal mosott 100 g karb- s oxámetiloellulózzal töltött 2,5 cm ^átmérőjű és 25 cm magas oszlopon kromatografáljuk. Eluálásna 2 liter 0,005 n és 2 liter 0,5 n ammóniumacetátból készült növekvő koncentrációjú oldaliakat használunk. Az alúciót 235 mi/i-nél észlelt 10 ultraibolya abszorpcióval követjük. A kívánt terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, és liofilizáljuk. A tenmék mennyisége 25 mg. A termék aminosavösszetétele: Arg 4,3, His 1,06, Bhe 1,0, Leu 6,3, Val 1,06, Ala 1,0, Gly 3,0, 15 Glu 34, Ser 3,7, Thr 1,8, Asp 2,0. A termék megoszlási állandója 1 :1 arányú n-fautanol — 0,1 mól foszfátpufifer (7 pH) között: K=iO,36. Elektrxjforetákus mobilitása 3,3 pH-nál Am = 32; 9,3 pH-nál Airt = 3. [Am def iní- 20 dóját lásd: L. N. Werum és munkatársai, J. Ctoromatogr. 3, li25 (I860)]. 2. példa: 25 t-Butíloxikaaiwndl-L-leucü-glMl-'L-jhisztidil-o-benzdl-L^zeril-LHasaparagilHglicinnbenziloxikarbonilihdd<razid 30 Az 1. példában leírt módon kapott tnbutiloxikarbonil-glicil-L-hisztidil-O-benzil-L-szeril-L-aszparagil-glicin-benziloxikarbonilhidrazid védett pentapeptidből 700 mg-ot feloldunk 5 ml trifluorecetsavban. Szobahőmérsékleten való 15 35 perces állás után a trifluorecetsavat vákuumban eltávolítjuk, és étert adunk a maradékhoz. A csapadékot szűrőre visszük, és vákuumban káliumhidroxidon megszárítjuk. Ezt a trífluoracetátot 5 ml dimetilíoRmamidban oldjuk, és 0,28 ml tri- 40 etilaimiLn jelenlétében 450 mg terc.-butiloxikarbonil-^-leucin^pnnitrofienilészteririel reagáltatjuk. Szobahőmérsékleten éjjelen át állni hagyjuk, az oldószert vákiüuimban részben eltávolítjuk, és a terméket etilacetáttal kicsapjuk, és elkülönítjük. 45 Hozam 600 mg. Olvadáspontja 180—485 °C. Leu-Gly-His-Ser-iAap-Gly-Thr-Bhe-nhr^Ser-Glu-Leu-Ser-ArgJjeu-<Arg-Asp-Ser-Ala-Arg-Lsu-Glu((íNH2)HArg-Leu-Leu-Glu(NH2)-Gly-Leu-Val-NH2 A példa első részében kapott védett hexapeptid-lhidrazidból 350 mg-ot palládiumszén jelenlétében hidrogénezünk, majd az amiddá való átalakítása után az 1. példa második felében leírt módon 56 mg szalbad trikozapeptid-amiddal reagáltatjuk. 25 mg nonako^apeptid^amidot kapunk, ezt a védőcsoport eltávolítása után kromatografálással elkülönítjük. A termék aminosavösszetétele: Arg 4,05, His 1,00, Pihe 1>1, Leu 7,3, Val 0,95, Ala 0,i92, Gly 3,05, Glu 3,1, Ser 3,6, Thr 1,9, Asp 2,00. A termék megoszlási állandója 1 :1 arányú n-butanol — 0,1 mól 'foszfátpuffer (7 pH) között: K = 0,57. Elektroforetikus mobilitása 3,3 pH-nál Am = 30; 9,3 pH-nál Am = 3. A kiindulása vegyületek előállítását a „Synthesis of Secretin" című cikksorozat ismerteti [J. Am. Ohem. Soc. 89, 685 (1967); 89, 6753 (1967) és 90, 471/1 (1968)]. Szabadalmi igénypont: Eljárás a terminális la-aminocsoportjukon szubsztituált R-szekretdn általános képletű új polipeptdidek előállítására — ebben a képletben R glicil- vagy L-leueil-gliicü-csaportot jelent — azzal jellemezve, hogy a) a szekretinmolekula terminális a-aminocsoportját aktivált karboxilosoportot tartalmazó glioinnel vagy L-leucil-glloinnel reagáltatjuk, vagy b) a szekretinmolekula terminális a-aminocsoporlgát tantalmazó valamely szekretinfragimens terminális a^aminocsopórtját aktivált karboxilesoportot tartalmazó glicinnel vagy L-leucil-glicinnel reagáltatjuk, és az így kapott poiipeptidhez hozzakaposolj.uk a szekretinmolekulának a megfelelő aminosavakból és/vagy peptidekből a peptidkémia szokásos módszerei szerint felépített kiegészítő részét. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. 7406050. Zrínyi (T) Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21—23. 3
