161816. lajstromszámú szabadalom • Eljárás alkalikus proteáz enzim bioszintetikus előállítására bacillus subtilis sűllyesztett tenyésztése útján
7 181816 8 14 nap alatt a fentiek szerint előállítót késztermék összaktivitása 468.468 AE volt. 3. példa: Az alkalikus proteáz termelésére alkalmazott Bacillus subtilis varietas proteolyticus spóraszuszpenziójával beoltottuk az 1. készülékben elkészített 1 m3 alábbi összetételű táptalajt: kukoricaliszt 2,0 % szójaliszt 1,0 % CaCl2 0,1 % KH2 P0 4 0,25% laktóz 0,8 % (katabolit represszor) 15 savkazein 0,3 % napraforgóolaj 0,1 % A tenyészetet 7,0 induló pH-n 35 °C-on 1 :1 levegőztetés mellett 24v óráig növesztettük. Közben a fent leírtakkal megegyező módon, de 0,9 m3 -es táptalaj térfogattal oltásra készítettük elő a 2. fermentort, s az előző sarzs térfogatának 10%-ával i(0,l m3 ) oltókörvezetéken át beoltottuk. Ekkor az 1. készülékben levő férmen tlé kora 24 óra, csíraszáma 6,2 x 109 /ml, enzimaktivitása 1,6 mAE/ml, laktóztartalma 0,4% volt. Az 1. készülékben oltás után megmaradt 0,9 m3 fermentlevet még 12 órán át változatlan körülmények között növesztettük, majd az 1. példában leírt módon feldolgoztuk. Az 1. készüléket kiürülése után oly módon készítettük elő, hogy mire a 2. készülékben indított tenyészet 24 órás korú volt, térfogatának 10%-ával elvégeztük az 1. készülék oltását. Atoltás után a 2. készülékben megmaradt 0,9 in3 , 24 órás korú tenyészetet még 12 órán át növesztettük, majd a fentiekkel egyező módon feldolgoztuk. A tenyészetek átlagos csíraszáma 24 órás korban 7,4 x xl09 /ml, 36 órás korban 9,8xl0 9 /ml, átlagos enzimaktivitása 24 órás korban 1,9 mAE/ml, 36 órás korban 60 mAE/ml, laktóztartalma 24 órás korban 0,34%, 36 órás korban 0,0% volt. A második átoltás után az újabb generációkban a csúcsaktivitások fokozatos növekedése és a fermentációs idők fokozatos lerövidülése volt megfigyelhető. 2 fermentorral (2 x 1,7 m3 = 3,4 m 3 fermentor térfogat) 14 nap alatt 13,5 sarzsot lehetett indítani. Miután az átlagos fermentlé-akivitás 60 mAE/ml volt, az átlagos fermentlé-összaktivitás 5 54 000 AE volt. Az átlagos szűrtlé térfogat 0,8 m3 , az átlagos szűrtlé-aktivitás 65 mAE/ml volt; ez 52 000 AE/sarzsnak felelt meg. Az előállított termék súlya sarasonként átlagosan 22 kg, aktivitása 2,25 AE/g volt. A szűrtlevek 10 összaktivitása számított kitermelés 95% volt. A 14 nap alatt a fentiek szerint előállított késztermék aktivitása 666.900 AE volt. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás alkalikus proteáz enzim bioszintetikus előállítására azzal jellemezve, hogy a Bacillus subtilis varietas proteolyticus (deponá-20 lási szám: OKI 54) mikroorganizmust félfolyamatos fermentációs eljárással tenyésztjük kukoricalisztet, szójalisztet, savkazeint tartalmazó ismert összetételű komplex táptalajon laktóz alkalmazásával, mimellett két fermentor alkalma-25 zása esetén az 1. fermentor szaporodó fázisában levő tenyészetének 10%-ával oltjuk a 2. fermentor steril táptalaját, majd a 2. fermentor szaporodó fázisban levő tenyészetének 10%ával oltjuk az 1. fermentor újólag készített ste-30 ril táptalaját, és az eljárást folyamatosan folytatjuk, mindenegyes fermentációból a szaporodó fázist követő termelő fázis befejezése után ismert módszerrel izolálva az enzimfehérjét. 35 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy a fermentációkat az alaptáptalajhoz adagolt 0,8% laktóz tartalommal indítjuk. 40 3. Az 1. és 2. igénypontban leírt eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy a fermentációkat 35 °C-on, 7,0 induló pH és 1:1 arányú levegőztetés mellett 2% kukoricaliszt, 1,0% szójaliszt, 0,1% kalciumklorid, 0,25% ká-45 liumhidrofoszfát, 0,3%, savkazein és 0,1% napraforgóolaj tartalmú, ismert összetételű alaptáptalajon folytatjuk le. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. 7406028. Zrínyi (T) Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21—23. 4
