161732. lajstromszámú szabadalom • Eljárás korrinvázas vegyületek fenol-formaldehid gyantakomplexeiből történő kinyerésére
7 161732 meghatározás szerint 363,6 mg. A meghatározást a British Pharmacopoeia 1968 „Cobalamin" c. cikkelyében (262. oldal) szereplő „Coloured impurities" cím alatt leírt módszer szerint végezzük. A koncentrátumot 360 g korpára vagy mészkőlisztre visszük fel és szárítás után takarmányozásra alkalmas koncentrált terméket nyerünk, vagy pedig a vizes koncentrátumból B12--vitamint ismert módon kristályos termékként kinyerjük. 3. példa 170 g nuccsnedves, étkezésre alkalmas állatok májából készült vizes kivonat fenol-forrmaldehid gyantáival leválasztott korrincád-fenolJoirmaldehid gyantakomplexéhez, mely az egyéb heimopoe^ tikus anyagokon kívül papínknomatográfiás meghatározás szerint 13,0 img Bi2-vitamint tartalmaz, 700 ml 1:3 térfogatarányú 0,1% NaCN-t tartalmazó, jégecettel PH 4,2^re állított aceton-víz elegyet adunk. 1 óráig tartó keverés közben a korrinoidok kioldódnak. A keveiréfcet szívószűrőre öntjük. A leoldási a szűrőn maradt anyagról az alkalmazott eluenssel addig folytatjuk, míg a lecsepegő oldat színtelen nem lesz. A víz-aceton elegyben, térfogatára számított 40 súly % ammóniumszulfátot tob. 450 g-ot feloldunk és az oldatot választó tölcsérbe öntjük. Az alsó vizes oldatot elöotjük, majd a felső, kb. 450 ml acetonos oldathoz fél-térfogat, kb. 230 ml toluolt öntünk. Összerázás után a Bi2-vitamin és az egyéb, kevéssé ismert hemopoetikus anyagok az elváló, alsó vizes fázisba mennek át. A szerves oldószert kevés vízzel összerázzuk és az egyesített vizes kivonatokat kloroformos összerázással mentesítjük a fenő l-f ortmaldehid kondenzátum nyomaitól. A vizes oldatot 40 C°-ot meg nem haladó hőmérsékleten, csökkentett nyomáson kb. 100 ml-ig bepároljuk. Mikrobiológiai értékmérés alapján a sűrítmény B^-vitamin tartalma 11,6 mg. A meghatározást az US. Pharmacopeia XVII. „Vitamin B12 Activity Assay" c. cikkelye szerint (864. oldal) végezzük el. A koncentrátumot ezután aszeptikus körülmények között, ismert módon végzett tisztítással steril injekciós májkószítménnyé dolgozzuk fel. 4. példa 132 g nuccsnedves, metanobaktériumos fermentációból fenol-formaldehid gyantával leválasztott korrinoid-fenol-formaldehid gyantakomplexhez, amely papírkromatográfiáis meghatározás szerint 159 mg B] 2-vitamint és 35,8 mg Bi2-vitaimin faktor III-at tartalmaz, 530 ml leoldó folyadékot adunk. A leoldó folyadékot úgy készítjük el, hogy 350 ml 0,1% nátriumcianidot tartalmazó vizes oldat lúgos p# értékét jégecettel 4,2-re állítjuk, majd 350 ml izopropanolt öntünk hozzá, Ebből 530 ml-t öntünk a rózsaszínű csapadékhoz. Két óráig tartó keverés után szívószűrőre öntjük és a szűrőn maradt anyagot a 5 maradék oldószerrel átmossuk. A szűrletként nyert sötétvörös oldatban, térfogatára számított 20 súly % ammonszulfátot oldunk, választótölcsénbe öntjük, majd az alsó színtelen vizes oldatot leengedjük és kevés izo-propanollal újból ki-10 vonatoljük. Az egyesített, felső fázisként kapott izo-propanolos sötétvörös oldathoz V2 tf. benzolt öntünk. Összerázás után a Ikorrinoidok mennyiségileg az újonnan elváló alsó vizes fázisba mennek át. 15 A felső szerves oldószeres fázist kevés vízzel összerázzuk, majd a vizes kivonatokat egyesítjük és 50 C°-ot meg nem haladó hőmérsékleten, csökkentett nyomáson kb. 30 ml térfogatra bepároljuk. A koncentrátum papírkromatográfiás 20 meghatározás szerint 144,3 mg B12 -vitamint és 32,7 mg Bi2-vitamin faktor III-at tartalmaz. A meghatározást a British Pharmacopoeia 1968 Cobalamin" c. cikkelyében (262. oldal) szereplő „Coloured impurities" cím alatt leírt módszer 25 szerint végezzük. 5. példa 30 135 g nuccsnedves, metanobaktériumos fermentációból fenol-formaldehid gyantával leválasztott korrinoid-fenol-formaldehid gyantakomplexhez, mely papírkromatográfiás meghatározás szerint a kísérő egyéb korrinoidok mel-35 lett 164 mg B12-vitamint és 55 mg B12-vitamin faktor III-at tartalmaz, 540 ml leoldó folyadékot adunk. A leoldó folyadékot úgy készítjük el, hogy 120 ml 0,1% nátriumcianidot tartalmazó, jégecettel 40 4,2 pH értékre állított vizes oldathoz 620 ml ipari vízmentes etanolt öntünk. Két óráig tartó keverés után szívószűrőre öntjük, majd a szűrőn maradt anyagot a maradék oldószerrel gondosan átmossuk. 45 A szűrletként nyert sötétvörös alkoholos oldathoz V2 térfogat kloroformot öntünk, majd választótölcsérben összerázzuk. A kivonat B12-VÍ-tamin és egyéb korrinoid tartalma a felső vizes 50 fázisba megy át. Az alsó alkohol^kloroform tartalmú elegyet kevés deszt. vízzel összerázzuk, majd a vizes kivonatokat egyesítjük. A kloroformos mosás után a vizes oldatot 50 C°-ot meg nem haladó hőmér-55 sékleten, csökkentett nyomáson kb. 30 ml-re bepároljuk. Papírkromatográfiás meghatározás szerint a koncentrátum 146 mg Bi2-vitamint és 49,6 mg Bi2-vitamin faktor III-at tartalmaz. A meghatá-60 rozást a British Pharmacopoeia 1968 „Cobalamin" c. cikkelyében (262. oldal) szereplő „Coloured impurities" cím alatt leírt módszer szerint végezzük. 4
