161709. lajstromszámú szabadalom • Eljárás B12-vitamin kinyerésére fermentlevekből

161709 15 16 oszlopon acetonnal kromatografáljuk, és végül kristályosítjuk a Bi2-vitamint; 2,1 mg légszáraz, kristályos Bi2-vitamint kapunk, a kiindulási kivonat kobalamintartalmára számolva a termelési hányad 44%. A papírelektroforézises vizsgálat eredménye szerint a kristályos termék 94,7% Bi2-vitamint és 5,3% más kobalaminokat tartalmaz, és színes szennyező anyagoktól mentes. 4. példa A termofil metánképző baktériumok fermentlevéből az 1. példa szerint készített tisztított vizes koncentrátumot használjuk, mely különböző kobalaminokból együttesen 296 mg-ot tartalmaz; elektroforézises és papírkromatográfiás vizsgálatok eredménye szerint az össz-kobalamintartalom 78%-a Bi2-vitamin, 15%-a B12-VÍ-tamin faktor III, és 7%-a más kobalamin. A koncentrátumot öt térfogatrész acetonnal (d = 0,786) hígítjuk, és akkor 81—80 súlyszázalék acetont tartalmazó vizes acetonos oldatot kapunk. A rövid idő múlva kiváló csapadékot szűréssel eltávolítjuk. 81 súlyszázalék acetont-tartalmazó vizes acetonoldat (d = 0,840) alkalmazásával kromatográfiás minőségű alumíniumoxiddal megtoltunk egy oszlopot. A kobalamin-elegy vizes-acetonos oldatát feltöltjük a kromatografálóoszlopra. A kobalaminok nagyobb része a szorbens-oszlop felső részében vörös színű zónát képez. Az alumíniumoxid-oszlopot a fenti töménységű vizes acetonoldattal mossuk. Ekkor a Bi2-vLtamin vörös színű gyűrűt képez, mely az utána következő faktor III-tól és a kísérő kobalaminok nagyobb részétől elkülöníthető, ezzel szemben a faktor B, néhány kobalamin és egy sárga színű, kísérő pigment az eluátum első részletével távoznak az oszlopból. Amikor a B12-vitamin vörös színű gyűrűje a szorbens-oszlop alsó harmadába érkezik, megkezdjük az 58 súlyszázalék acetont tartalmazó vizes acetonoldattal (d = 0,897) való eluálást. A Bi2-vitamin eluátumát megelőző, illetőleg az utána következő eluátum-frakciókat külön szedőkbe szedjük. A kapott, sötétvörös színű eluátumból hat térfogatrész aceton (d = 0,786) hozzáadása után kikristályosítjuk a B-vitamint. 117 mg sötétvörös színű, légszáraz, kristályos terméket kapunk, nedvességtartalma 10%; a termelés a kiindulási koncentrátum. Bj2-vitamintartalmára számolva 55,4%. Az elektroforézises és a papírkromatográfiás vizsgálatok eredménye szerint a kristályok 97% B12-vitamint és 3% nem azonosított kobalamint tartalmaznak, faktor III-tól és sárga pigmentektől mentesek. A A kiadásért felel: a Közs 74.6011/4 — Zrínyi Nyomda, faktor III és más kobalaminok mellett csekély mennyiségű Bi2-vitamint is tartalmaz a vizes acetonoldattal (d = 0,897) való mosással kapott másik két eluátum-frakció. 5 Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás a Bi2-vitamin elkülönítésére az ilyen vitamint termelő mikroorganizmusok fer-10 mentlevéből vagy biomasszájából <a fermentlé vagy biomassza sósav közegben történő hidrolízise vagy vizes-szerves oldószereleggyel történő extrakciója, a kapott hidrolizátum illetőleg kivonat vizes közegben alumíniumoxidon való ad-15 szorbeáltatás útján történő tisztítása, a tisztított oldat ciánnal való kezelése, útján a Bi2-vitamin cián-alakban történő átvitele, a ciánnal kezelt oldat szerves oldószerrel történő extrahálása, a Bi2-vitaminnak vizes acetonos oldatból alumí-20 niumoxidon lefolytatott kromatografálással a kísérő kobalaminoktól való elválasztása és az így elkülönített vitamin acetonból történő kristályosítása útján> azzal jellemezve, hogy a fermentlé és/vagy biomassza hidrolízisét 96—98 C° hő-25 mérsékleten, 4,0 pH-értéken, 0,5 súly% ammóniumrodanid és 0,5 súly% N-klór-benzolszulfonamid-nátriumsó jelenlétében végezzük, a hidrolizátum szorpciós tisztítását savas alakban levő alumíniumoxidon 3—5 pH-értéken és alkalikus 30 alakban levő alumíniumoxidon 8—10 pH-értéken folytatjuk le, és a Bi2-vitamint a faktor III-tól alumíniumoxidon, 80—81 súly% acetont tartalmazó vizes aceton-oldattal történő kromatografálással választjuk el. 35 2. Az'l. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a fermentlé vagy a biomassza hidrolizátumát valamely H-fázisban levő monofunkciós karbonil-kationcse^ rélő polimergyantával kezeljük 2,5—3,0 pH-érté-40 kű közegben, a kationcserélőgyantán adszorbeált Bi2-vitamint vizes ammóniaoldattál, majd ammonias borát-pufferoldattal eluáljuk, és a színes szennyező anyagokat alkalikus alakban levő alumíniumoxiddal 8—9 pH-értéken, majd savas 45 alakban levő alumíniumoxiddal 3—4 pH-értéken adszorbeálhatjuk, a tisztított Bi2-vitamin-oldatot ciánnal kezeljük és ezután végezzük el a további feldolgozási műveleteket. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás fo-50 ganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy oly savas alakban levő alumíniumoxidot alkalmazunk, amelynek vizes kivonata 3 pH-értéket mutat. 4. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás fo-55 ganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy olyan bázisos alakban levő alumíniumoxidot alkalmazunk, amelynek vizes kivonata 10 pH-értéket mutat. ' - ' ' és Jogi Könyvkiadó Igazgatója t — Felelős vezető: Bolgár Imre 8