161709. lajstromszámú szabadalom • Eljárás B12-vitamin kinyerésére fermentlevekből
161709 7 8 acetonnal vagy vizes rövidszénláncú alifás alko^ hollal, majd a kívánt terméket acetonból vagy valamely alkoholtól kristályosítjuk. Ha faktor III is van az elegyben, akkor célszerű a kobalaminok szétválasztása céljából az alumíniumoxidon Való kromatografálást 0,842 fajsúlyú vizes acetonoldatban végezni, majd a B^-vitamint olyan vizes acetoneleggyel eluálni, melynek sűrűsége d = 0,897—0,900. E művelettel a B12-vitamin elkülöníthető a faktor III—tói; más körülmények között kromatográfiás módszerrel e komponensek nem választhatók szét. A kívánt terméket előnyösen acetonból kristályosítjuk. Ha a hidrolizátum vagy az extraktum nagyon sok színes szennyezőanyagot tartalmaz, ajánlatos a szorbensekkel való tisztítás megkönnyítése céljából a szubsztrátumokat 2,5—3 pH-jú közegben H-fázisú, monofunkciós karboxil-kationcserélő polimer gyantákkal kezelni. E művelet közben a Bi2-vitamint a fenti kationcserélő gyanta adszorbeálja, a szennyezőanyagok jelentős része az oldatban marad, és azzal együtt eltávolítható. A B12-vitamint vizes ammónia-oldattal, majd ammonias borái>pufferrel eluáljuk. Ilyenfajta kezelés ismeretes már az aktinomicétákkal, propionsav-baktériumokkal és más mikroorganizmusokkal termelt fermentlevekből vagy biomasszából kapott hidrolizátumok és extraktumok tisztítására, ahol ez a kezelés kielégítő tiszrtítást eredményez. Bizonyos szubsztrátumok, pl. a metánképző baktériumokat tartalmazó fermentlevek feldolgozása esetén azonban az eluátumban oly sok a színes szennyezőanyag, hogy ezek az ismert tisztítási eljárások legtöbbjével nem tisztíthatók. A találmány szerinti eljárás, mely a fenti eluátumok tisztítására alkalmas, lehetővé teszi a színes szennyezőanyagok tökéletes eltávolítását. A kapott lúgos eluátumot lúgos alumíniumoxiddal kezeljük 8—9 pH-jú közegben, majd savas alumíniumoxiddal 3—4 pH-jú közegben. Az így tisztított oldatot ciánozzuk, majd a fenti módon folytatjuk a kezelést. A találmány szerinti eljárással a Bi2-vitamin elkülöníthető a nevezett vitamint termelő különböző mikroorganizmusokkal kapott fermentlevekből. A termofil metánképző baktériumos fermentlén vagy biomasszán kívül pl. a propionsav-baktériumos fermentlevet vagy biomasszát is fel lehet dolgozni. A fenti eljárás azonban a leggazdaságosabban a termofil vagy mezofil me^ tánképző baktériumokkal termelt f ermentlé vagy biomassza feldolgozására használható. A Bi2-vitamint az azt termelő mikroorganizmus fermentlevéből, Vagy az e férmentléből valamilyen módon, pl. szeparálással vagy centrifugálással elkülönített biomasszából nyerhetjük ki. A fermentlevet visszafolyató hűtővel, hőmérővel, keverővel és a reakcióelegy melegítésére ill. hűtésére szolgáló berendezéssel ellátott készülékben hidrolizáljuk, 96—98 C°-os hőmérsékleten, 4,0 pH-jú savanyú közegben, 0,5 súlyszázalék ammóniumrodanid vagy 0,01 súlyszázalék káliumcianid stabilizátor és 0,5 súlyszázalék klóramin B vagy 0,25 súlyszázalék klórszukcinimid roncsolóanyag jelenlétében. A biomasszát (a vitamint termelő mikroorganizmusok elkülönített sejtjeit) előzetesen felhí-5 gítjuk több térfpgatrész vízzel, majd a fenti módon végezzük a hidrolízist. A biomasszát a fenti készülékben, a fenti stabilizátorok alkalmazásával, szobahőmérsékleten extraháljuk víz/aceton eleggyel. 10 A hidrolízis vagy az extrakció után a szilárd részecskéket dekantálással vagy szeparálással stb. különítjük el a folyadéktól. A kapott folyadékból a színes szennyezőanya-1!> gokat speciálisan elkészített szorbensekkel adszorbeáltatjuk, pl. savas alumíniumoxiddal 3—5 pH-jú közegben, és lúgos alumímumoxiddal 8— 10 pH-jú közegben. E szennyezőanyagok az alumíniumoxid fenti alakjainak tetszőleges sorrend-20 ben való alkalmazásával gyakorlatilag tökéletesen eltávolíthatók. Savas alumíniumoxid készítése céljából 1,5— 2,0 liter 0,2 n sósavhoz 1 kg kromatográfiás minőségű Al2C>3-ot elegyítünk (e készítmény vizes 25 kivonatának pH-értéke = 7), az elegy pH-értékét keverés' közben beállítjuk 3,5-re, majd várunk, míg a kivált szorbens sűrű üledékréteget képez, ekkor a csapadék feletti zavaros folyadékot leszívatjuk, és többször mossuk a szorbenst 30 kevés 0,01 n sósavval, míg a vizes réteg pH-értéke 3,0 lesz. Az így készített savas alumíniumoxid használatra kész. Lúgos alumíniumoxid készítése céljából 1,5— 2,0 liter 0,05 n káliumhidroxidoldathoz 1 kg kro-35 matográfiás minőségű Al203-ot elegyítünk (e készítmény vizes kivonatának pH-értéke =7), az elegy pH-értékét keverés közben beállítjuk 12— 13-ra. Ezután várunk, míg az oldat enyhén zavaros lesz, majd a csapadék feletti folyadékot 40 leszívatjuk, ä szorbenst desztillált vízzel több ízben mossuk, míg a vizes réteg pH-érté'ke 10,0 lesz. Az így készített alumíniumoxid használatra kész. A fenti módon készített szorbensek vizes ol-45 datokból hatékonyan képesek adszorbeálni színes szennyezőanyagokat, és a PH-értéktől függően igen szelektíven adszorbeálnak. Az alumíniumoxid tehát a savas, illetőleg lúgos alakjában bizonyos fokig ioncserélő tulajdonságokkal 50 rendelkezik. A fenti szorbensek egyébként széles pH-tartományon belül nem kötik meg a B-vitamint és más kobalaminokat. Az alumíniumoxid fenti két alakjával vagy dinamikus körülmények között, a folyadéknak na-55 gyobb átmérőjű oszlopokban elhelyezett szorbensen pl. szívás vagy nyomás alkalmazásával történő átvezetésével vagy pedig statikus körülmények között végezzük a kezelést, és ebben az esetben a készülékben a tisztítandó oldatot a 60 szorbens kisebb adagjaival (térfogatarány = 10:1 vagy 20:1) keverjük, és a szorbenst többször kicseréljük új adagra. Az elhasznált szorbenst a B12 -vitamintartalmú oldat maradványainak kimosása céljából kevés vízzel többször mos-65 suk, a mosóvizet pH 4,0-re savanyítjuk vagy pH
