161697. lajstromszámú szabadalom • Eljárás (-) ciszepoxipropilfoszfonsav előállítására

161697 10 Táptalaj DL-metionin g/l Mononátriumglutamát g/l alap termelő alap termelő alap termelő alap termelő 0 0 1,0 1,0 0 1,0 0 1,0 Növekedés, Antibiotikum, pH becsült egység/ml 3 nap 3 nap 4 nap 8,1 +3 0 0,1 8,5 +3 0 0,29 7,9 +3 0 0,1 8,4 +3 0,52 0,51 C) Termelő táptalaj Mennyiség kukoricakeményítő 2 % L-aszparagin 0,5 % nátriumcitrát 0,4 % K2

HP0

4 0,1 % CaCl2

. 2H

2

0 0,05 % MgS04

. 7H

2

0 0,02 % C0CI2 . 6H2

0 0,01 % nyomelem (a fenti keverék) desztillált H2

0 pH = 7,0 1 egység 2,8 /"g/ml szabad savval egyenértékű. Mint fentebb bemutattuk, az alaptáptalajt használva a (-) cisz-l,2-epoxipropilfoszfonsav termelése mononátriumglutamát adagolására 0,1-ről 0,29 egység/ml-re nő. Az alaptáptalaj +DL-metionin változat alkalmazása esetén a (-) cisz-1,2-epoxipropilfoszfonsav-termelés mononátriumglutamát adagolásáról 0,1-ről 0,52 egység/ml-re nő. 2. példa 15 20 Streptomyces fradiae NRRL B—3360-at tenyésztettünk az alábbi összetételű ferde agar táptalajon: A) „Ferde" táptalaj Mennyiség kukoricakeményítő 1 % L-aszparagin 0,1% K2HPO4 0,1% agar 2 % E tenyészet egykacsnyi mennyiségével egy 250 ml-es terelőlapos Erlenmeyer-lombikban 40 ml, alábbi összetételű sterilizált inokulum-táptalajt oltottunk be: B) 25 30 35 Ezután a lombikokhoz vizes mononátriumglutamát-oldatot adagolunk 0,1% végkoncentráció elérésére. Ezeket a lombikokat sterilizáltuk, lehűtöttük és 1,0 ml fenti módon előállított inokulummal oltottuk be. A beoltott lombikokat 28 °C-on inkubáltuk egy 5 cm löketű 220/perc fordulatszámú körrázógépen, és a lombikokat négy nap múlva szedtük le. A fermentáció befejeződése után a sejteket centrifugálással távolítjuk el és a felülúszót pH 8,0 0,05 M trisz-pufferrel hígítottuk. A fermentlében keletkezett antibiotikum koncentrációját a standard biológiai módszerrel határoztuk meg. Az alkalmazott kísérleti organizmus Proteus vulgaris MB—838 volt. Az ily módon végrehajtott három fermentáció eredmé-Inokulum-táptalaj Mennyiség nyeit az alábbiakban mutatjuk be kukoricakeményítő 2 % 40 L-aszparagin 0,5 % A kísérlet Beadagolt Antibiotikum, mononátrium-L-glutamát 0,1 % sorszáma mononátriumgamma/ml nátriumcitrát 0,4 % glutamát 4 nap K2HPO4 0,1 % K2HPO4 0,1 % CaCl2

. 2H

2

0 0,05% 45 I. 0 13,2 MgS04

. 7H

2

0 0,02% 0,1% 19,6 CoCl2

. 6H

2

0 0,01% II. 0 15,9 desztillált H2

0 0,1% 25,8 pH =7,0 III. 0 n;i 50 0,1% 16,9 Nyomelemoldatot adagolunk oly módon, hogy a következő minimális koncentrációkat érjük el: Képlet, nyomelem MnS04

. 7H

2

0 CuCl2

. 2H

2

0 FeS04

.

7H2

0 H3BO3 10 mg/l 0,25 mg/l 10 mg/l 0,56 ml/l 55 3. példa Streptomyces fradiae NRRL B—3360-at tenyésztettünk az alábbi összetételű ferde agar táptalajon : A beoltott lombikot három napon át 28 °C-on inkubáltuk, majd felhasználásig 5 °C-on tároltuk. Két 250 ml-es Erlenmeyer-lombikot készítettünk elő, amelyek 30—30 ml következő összetételű táptalajt tartalmaztak: 60 A) „Ferde" táptalaj kukoricakeményítő L-aszparagin K2HPO4 65 agar pH = 7,0 Mennyiség 1,0% 0,1% 0,1% 2,0%