161695. lajstromszámú szabadalom • Eljárás (-) cisz-1,2-epocipropilfoszfonsav előállítására
161695 9 3. példa Streptomyces fradiae NRRL B—3360-at tenyésztettünk az alábbi összetételű ferde agáron: A) kémcsőtáptalaj Mennyiség kukoricakeményítő 10,0 gramm aszparagin 1,0 gramm K2 HP0 4 1,0 gramm H2 0 1000 ml pH = 7,0 Ezen tenyészet egykacsnyi mennyiségével egy 250 ml-es terelőlapos Erlenmeyer-lombikot oltunk be, amely 40 ml alábbi összetételű inokulum-táptalajt tartalmaz: 10 B) Inokulum-táptalaj kukoricakeményítő aszparagin K2HPO4 H2 0 pH = 7,0 Mennyiség 10,0 gramm 1,0 gramm 1,0 gramm 1000 ml Az inokulált lombikot 28 °C-on két napon át inkubáljuk 5 cm excentricitású, 220 ford./perc sebességű körrázógépen. Hat, 250 ml-es Erlenmeyer-lombikot készítettünk el, amelyek közül mindegyik 30 ml alábbi összetételű táptalajt tartalmaz: C) Kémiailag definiált termelő táptalaj kukoricakeményítő K2 HP0 4 nátriumaszkorbát nátriumcitrát FeS04 . 7H 2 0 2. sz. nyomelemkeverék* NaCl MgS04 . 7H 2 0 CaCl2 . 2H 2 0 bakto-aszparagin D,L-metionin mononátriumglutamát vitaminkeverék-koncentrátum** desztillált H2 0 pH = 6,8—7,0 2. sz. nyomelemkeverék* FeSO 4 7H2 0 MnS04 . 4H 2 0 CuCl2 . H 2 0 CaCl2 H3BO3 (NH4 ) 6 Mo 7 0 2 4. 4H2 0 ZnSO/,. 7H2 0 desztillált H2 0 Vitaminkeverékkoncentr átum* * vitamin kalciumpantotenát B2 (riboflavin) B6 (piridoxin) Mennyiség 20 0,5 0,5 1,0 gramm gramm gramm gramm 0,03 gramm 10 0,3 0,2 0,5 5,0 1,0 1,0 ml gramm gramm gramm gramm gramm gramm 5,0 ml 1000 ml 1,0 gramm 1,0 gramm 25 mg 100 mg 56 mg 19 mg 200 mg 1000 ml súly 200 mg 200 mg 200 mg 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 B6 (piridoxál) niacin p-aminobenzoesav biotin B12 B4 (tiamin) desztillált H2 0 200 mg 200 mg 20 mg 1,5 mg 0,4 mg 200 mg 1000 ml Ezután vizes nátriumcitrát-oldatot adagoltunk a lombikokhoz; így az alábbi táblázatban feltüntetett nátriumcitrát-végkoncentrációkat kaptuk. Ezeket a lombikokat sterileztük, lehűtöttük és beoltottuk 1,0 ml-rel a fent leírt módon előkészített inokulumtenyészetből. A beoltott lombikokat 28 °C-on inkubáltuk egy 5 cm excentricitású, 220 ford./perc sebességgel működő körrázógépen, és 4 napi inkubálás után 1 lombikot leszedtünk. A lombikok tartalmát centrifugáljuk — 10 percen át 8500 ford./perc sebességgel —, és a felülúszót leöntjük a szilárd anyagról. A felülúszó folyadékot tesztorganizmusként Proteus vulgaris MB—838 alkalmazásával vizsgáljuk meg. A 3, illetve 4 napi inkubálás után kapott fermentlevek vizsgálatának eredményeit az alábbiakban mutatjuk be: Táptalaj g/l nátriumcitrát . 2H2 0 kémiailag definiált termelő 1,0 kémiailag definiált termelő 2,0 kémiailag definiált termelő 4,0 egység/ml antibiotikum 3 nap 4 nap 0,59 2,46 3,97 0,56 2,99 4,11 1 egység 2,8 ,"g/ml szabad savval ekvivalens. A nátriumcitrát adagolása 6—7-szeres hatóérték-növekedést eredményezett a koncentráció 1-ről 4 g/l-re való emelése során. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás (-) cisz-l,2-epoxipropilfoszfonsav előállítására, amelynek során valamely (-) cisz-1,2-epoxipropilfoszfonsav-termelő, a Streptomyces-törzshöz tartozó mikroorganizmust vizes táptalajban aerob körülmények között, 20—40 °C-on 2—5 napig tenyésztünk és a keletkező fermentléből izoláljuk a (-) cisz-l,2-epoxifoszfonsavat, azzal jellemezve, hogy a táptalajhoz, a közeg 1 literére számítva 1,0-8,0 g nátriumcitrátot vagy ezzel egyenértékű mennyiségű egyéb citrátvegyületet adagolunk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy mikroorganizmusként valamely Streptomyces fradiaetörzset, pl. az NRRL B—3357, NRRL B—3358, NRRL B—3359, NRRL B—3360 törzsek valamelyikét alkalmazzuk. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy mikroorganizmusként valamely Streptomyces wedmo-
