161694. lajstromszámú szabadalom • Eljárás (-) cisz-1,2-epoxipropilfoszfonsav előállítására
9 161694 10 szabad sav C) Táptalaj g/l pH növekedés gamma/ml K2HPO4 3 nap 4 nap 3 nap > 4 nap 3 nap 1 nap termelő 0 8,4 8,4 +2 +2 <3 <3 termelő 0,1 8,3 8,4 +3 +3 <3 <3 termelő 0,2 8,0 8,5 +3 +3 <3 <3 termelő 0,5 8,8 9,0 +3 +3 8,1 7,7 termelő 1,0 9,1 9,1 +3 +3 27,5 26,8 termelő 2,0 9,0 9,0 +3 +3 26,5 27,6 2. példa B) Termelő táptalaj Mennyiség kukoricakeményítő 20,0 g A (-) cisz-1,2-epoxipropilf oszf onsav -termelést 15 K2HPO4 0,5 g az 1. példában megadott módon hajtottuk végre. nátriumcitrát 4,0 g A ferde agar tenyészetet egy 250 ml-es terelőlabakto-aszparagin 5,0 g pos Erlenmeyi er-lombik beoltására használtuk fel, DL-metionin 1,0 g amely 40 ml alábbi összetételű inokulum-táptamononátriumglutamát 1,0 g lajt tartalma2 20 C0CI2 • 6H2 0 CaCl2 . 6H 2 0 0,1 g 0,5 g A) Inokulum-táptalaj Mennyiség MgS04 . 7H 2 0 0,2 g kukoricakeményítő 20,0 g 2 sz. nyomelemkeverék (lásd az 1. példát) 10 ml K2 HP0 4 0,5 g 35 deszt. H2 0 1000 ml nátriumcitrát bakto-aszparagin DL-metionin mononátriumglutamát C0CI2 . 6H2 0 CaCl2 . 6H 2 0 MgS04 . 7H 2 0 2 sz. nyomelemkeverék (lásd az 1. példát) deszt. H2 0 4,0 g 5,0 g 1,0 g 1,0 g 0,1 g 0,5 g 0,2 g 10 ml 1000 ml Az inokulumlombikot két napon át 28 °C-on inkubáltuk egy 5 cm löketű, 220 ford./perc sebességű körrázógépen. 4 db 250 ml-es Erlenmeyer-lombikot készítettünk elő, amelyek 30 ml összetételű táptalajt tartartalmaztak (B) Termelő táptalaj): C) Táptalaj Adagolt, g/l összes KCl K2HPO4 K2HPO4 30 35 40 45 Két lombikhoz 0,45 g/l koncentrációjú vizes KCl-oldatot adagoltunk. Két másik lombikhoz 0,5 g/l koncentrációjú vizes K2HP04 -oldatot adtunk. Mindegyik lombikhoz annyi vizes K2HPO4-oldatot adtunk, hogy az alábbi táblázatban feltüntetett K2 HP04-végkoncentrációt érjük el. Ezeket a lombikokat azután sterileztük, lehűtöttük és 1,0 ml, alábbiak szerint előállított inokulummal oltottuk be. A beoltott lombikokat 28 °C-on 5 cm löketű, 220/perc fordulatszámú rázógépen inkubáltuk. Egy lombikot három-, egy másik lombikot négynapi inkubálás után vettünk le. Az egyes lombikok tartalmát 10 percen át 8500 ford./perc sebességgel centrifugáltuk és a felülúszót dekantáltuk. A felülúszót tesztorganizmusként Proteus vulgaris MB—838 felhasználásával határoztuk meg. A három-, illetve négynapi inkubálás után kapott fermentlevek vizsgálatának eredményeit az alábbiakban mutatjuk be: pH termelő 0,45 0 0,5 9,0 termelő 0 0,5 1,0 9,1 KCl: 0,45 g/l kb. 0,236 g/l K-mal egyenértékű K2 HP0 4 : 0,5 g/l kb. 0,224 g/l K-mal egyenértékű A K2 HP04-koncentráció 0,5-ről 1,0 g/l-re növelése eredményeként kapott megnövekedett hatóérték inkább az adagolt foszfátnak tulajdonítható, mint a kálium hatásának, mivel a KCl-dal kapott azonos káliumszint nem biztosította az an- 60 tibiotikum maximális kitermelését. Növekedés 3 nap +3 +3 Szabad sav gamma/ml 3 nap 4 nap 6,7 5,6 26,0 28,0 3. példa Ebben a példában az 1. példában megadott or-65 ganizmust, ferde agar és inokulum-táptalajt és eljárást alkalmaztuk a (-) cisz-l,2-epoxípropilfoszfonsav termelésére, annak kimutatására, hogy hogyan befolyásolja a foszfátadagolás a folyamatot kémiailag definiált közegben. Meghatároztuk nátriumklorid vagy káliumklorid jelenlétének hatását is az antibiotikum előállítására szolgáló termelő táptalajban. A 3., illetve 4. napi inkubálás után kapott fermentlevek meghatározási eredményeit a következőkben adjuk meg:
