161670. lajstromszámú szabadalom • Eljárás markolidantibiotikum előállítására streptomycestörzs segítségével

161670 előkultúra beoltására 1—2 térf.%-ban a 48 óra hosszat tenyésztett 1. előkultúrát használjuk, melyet az előzőekben leírt tenyésztési körülmények mellett, rázunk. A megfelelő oltótartályt, pl. 20 1, ill. 150 1 hasznos térfogattal, az előbb megadott összetételű táptalajjal megtöltjük, melyet 0,5% 2. előkultúrával beoltunk, majd 24 óra hosszat levegőztetéssel és keveréssel tenyésztünk. Az így kapott süllyesztett kultúrát, mint oltókultúrát 5 térf.%-ban egy nagyobb fermentor beoltására használjuk. Fermentációs közeg: cukorrépamelasz 0,5% dextrózlé (glükózra számítva) 0,5% burgonyakeményítő 4,0% szójababliszt 2,0% száraz élesztő 0,3% CaCOs 0,2% napraforgóolaj (nyers) 0,5% sterilizált csapvíz pH 6,8 — 7,0 A fermentációt levegőztetéssel és keveréssel 29—30 °C-on végezzük. A maximális A 6599 antibiotikum-képződést 3—4 napig tartó tenyésztési idővel érjük el. 3. példa 1200 1 275 r/ml anyagtartalmú tápoldatot 5 °C-ra lehűtünk, oxálsavval pH 3-ra megsavanyítunk és a micéliumot elkülönítjük. A vizes oldat nátronlúggal való semlegesítése után a tisztára szűrt tenyészoldatot pH 8-ra beállítva, 400 1 butilacetáttal extraháljuk. A butilacetátot 80 1 0,01 n kénsavval reextraháljuk. Az azonnal semlegesített oldatot 20 1 térfogatra bepároljuk, nátronlúggal pH 8-ra beállítjuk, majd ezt követően kétszer 5 és 2,5 1 kloroformmal extraháljuk és az egyesített kloroformos extraktokat 0,3 1 térf gátra betöményítjük. A betöményített klorofc mos oldatot keverés közben 5 1 petroléterbe cs pegtetjük, miáltal az A 6599 antibiotikum-báj 5 kicsapódik. Termelés: 110 g, olvadáspont: 118—122 °C. 10 4. példa 52 g A 6599 antibiotikum-bázist 200 ml ac tonban oldunk, 20 g aktív szénnel derítjük és kg Brockmann-féle alumíniumoxidon kromato rafáljuk, majd acetonnal eluáljuk. Az 1 1 akt 15 acetonos eluátumot bepároljuk, a maradékot 1 ml kloroformban oldjuk és a kloroformos old tot keverés közben 3 1 petroléterbe csepegtetjü A tiszta A 6599 bázist leszűrjük és szárítjuk. Termelés: 41 g, olvadáspont: 128—134 °C. 20 5. példa 50 g nyers A 6599 antibiotikum-bázist 150 i 25 acetonban oldunk, 10 g aktív szénnel derítüi és 500 g Brockmann-féle alumíniumoxidon kr matografálunk. Az aktív acetonos eluátum b párlása után 45 g tisztított bázist mint szára anyagot kapunk. Ezt az anyagot 50 ml aceto 30 ban elkeverjük, melyhez 300 ml acetonban ( dott 13 g borkősavat adunk. Az acetonos el gyet, keverés közben, 4 1 éterbe csepegtetjü mire az A 6599 antibiotikum tartarátsója kies pódik. 35 Termelés: 35 g, olvadáspont: 134—138 °C. Az anyalúgból még további 7 g anyag külön: hető el. 40 6. példa 51 g tisztított A 6599 antibiotikum-bázist 1 ml víz és 13,5 g borkősav oldatában oldunk és oldatot 10 g aktív szénnel színtelenítjük, majd 45 szűrletet fagyasztásos szárításnak vetjük alá. Termelés: 58 g. olvadáspont: 133—137 °C.