161654. lajstromszámú szabadalom • Eljárás anyarozs alkaloidok előállítására fermentációval

5 161654 6 eluáltunk. Az ergotamint és ergometrint, valalamint az egyéb alkaloidokat (ergotaminint) jól elkülönítve kaptuk. Az ergotaminos frakciókat bepároltuk és 80%-os acetonból kristályosításokat végeztünk; a kapott 3 g kristályos termék op-ja Boetius-készüléken 178—181 °C volt. Rétegkromatográfiás azonosítást is végeztünk több rendszerben [Szorbens: Kieselgel G (Merck); futtató: kloroformmetanol (95:5); benzol-metanol (90:10); UV-értékelés: Desaga UVIS-lámpa alatt 254 és 366 mm-nél]. A kristályos termék sósavas hidrolizátumában a fenilalinint és prolint találtuk aminosav-összetevőnek, (MN-cellulózpor 300 rétegen és n-butanol—jégecet—víz 4:1:5 arányú elegyének szerves fázisával végzett futtatás esetén, az előhívást acetonos minhidrin-reagenssel végeztük). Az egyéb alkaloidokat tartalmazó frakciókban az alkaloidokat tesztanyagok felhasználásával rétegkromatográfiásan (az előbbi rendszerekben) azonosítottuk. 3. példa Az 1. példa szerinti táptalajt úgy módosítjuk, hogy a szacharóz helyett 5% glükózt és 5% mannitot adunk a' táptalajba. Ebből a táptalajból 80 ml-t 500 ml-es Erlenmeyer-lombikba viszünk be, majd beoltjuk az 1. példa szerinti öszszetételű táptalajon nőtt 3 napos rázott tenyészet 20 ml-ével, amelyet 6 hetes 40% szacharózt tartalmazó felületi tenyészetből oltottuk. Az így oltott tenyészeteket 7 napig rázatjuk. A tenyészet alkaloidtartalmát a fermentléből 8 pH-n éterrel, a micéliumból aceton híg. BaCOs-oldatelegyével nyerjük ki, majd a kapott nyersbázist a 2. példa szerint tisztítjuk. Az alkaloid-összetétel megegyezett a felületi tenyészetek alkaloidtartalmával. Az összalkaloidtartalom 1650 /*g/ml, amelynek 80%-a ergotamin és ergotaminin. 5 4. példa 100 ml alábbi összetételű táptalajt: 5% szorbit, 2% kukoricalekvár, és az 1. példa szerinti ásványi sók, beoltunk a Claviceps purpu-10 rea OKI 56/70. sz. alatt letétbe helyezett törzsének 3. példa szerinti rázott tenyészetéből 100 ml-rel. 3 napos korban átoltunk 400 ml 1. pl. szerinti táptalajt tartalmazó 1000 ml-es Erlenmeyer-lombikba és ezt 5 napig rázóasztalon rá-15 zatjuk, majd ebből a tenyészetből 40 ml-rel beoltunk 160 ml módosított 1. példa szerinti táptalajt tartalmazó 1000 ml-es Erlenmeyer-lombikot, amely borostyánkősav helyett 1% aszparagint tartalmaz. A 7 napos rázott tenyészetek alkaloid-20 tartalmát a 3. példa szerint extraháljuk és a 2. példa szerint tisztítjuk és vizsgáljuk. Az összalkaloid-tartalom 1300 («g/ml volt. Az alkaloidösszetétel lényegileg megfelelt a felületi tenyészetek alkaloid-összetételének azzal az eltéréssel, 25 hogy a vízben oldható alkaloidok aránya 30% volt. Szabadalmi igénypont 30 1. Eljárás anyarozs alkaloidok, főként ergotamin mikrobiológiai úton szaprofitatenyészetben való előállítására, azzal jellemezve, hogy a Claviceps purpurea OKI 56/70. sz. alatt letétbe helyezett új anyatörzset felületi vagy alámerülő 35 tenyészetben szénforrást, nitrogénforrást és ásványi sókat tartalmazó táptalajon tenyésztjük és az alkaloidokat a micéliumból és fermentléből kinyerjük. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. Győr-Sopron megyei Nyomdavállalat 74.357