161592. lajstromszámú szabadalom • Stabilizált enzimtartalmú vizsgálati reagensek

MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja 1970. VI. 12. (BO-1234) Elsőbbsége Német Szövetségi Köztársaság, 1969. VI. 13. P 19 30 059.5. Közzététel napja 1972. V. 28. Megjelent 1974. VII.3. 161592 Nemzatkózi osztályozás: GOl n 33/16 A 61 k 19/00 A 61 k 27/10 Feltalálóik) Dr. Bergmeyer Hans Ulrich vegyész, Tutzing/Obb., Bernt Erich gyógyszerész, München, Német Szövetségi Köztársaság. Tulajdonos: Boehxinger Mannheim GmbH., Mannheim-Waldhof, Német Szövetségi Köztársaság. Stabilizált enzimtartalmú vizsgálati reagensek 1 A találmány stabilizált, enzimtartalmú vizseálati reagomsekre, valamint ezek előállítási eljárására vonatkozik. Enzimatikus vizsgálatoknál, főként diagnosztikai céloki.i. rendkívüli fontosságú, hogy az enzimatikus reakciókhoz szükséges anyagok, mint szubsztrátumok, enzimek, koenzimek, pufferanyagok, stb. használatra kész állapotban, és a helyes arányoknak megfelelően álljanak rendelkezésre. A reakciók lefolytatásához szükséges összes anyagot tartalmazó kombinált készítményekkel bizonyos vizsgálatok kevéssé képzett személyekkel is könnyen és biztonságosan lefolytathatók. A kombinált készítmények előállításánál azonban számottevő nehézségek lépnek fel. A tapasztalatok szerint ugyanis a szükséges anyagok tiszta formában viszonylag stabilak, a vizsgálati készítményekben jelenlevő egyéb komponensek jelenlétében azonban gyakran instabillá válnak, ezért tárolás közben olyan erős aktivitás-, illetve koncentrációcsökkenést szenvednek, hogy a kombinált készítmények gyakorlati értéke kérdésessé válik. Ez főként olyan kombinált készítményeknél áll fenn, amelyek redukált vagy oxidált alakban nikotinsavamid- adenin-dinukleotidot (NAD/NADH). nikotinsavamid-adenin-dinukleotidfoszfátot (NADP/ NADPH), valamint purin-vagy pirimidin-nukleotidokat tartalmaznak. 10 15 20 Hasonló összetételű, enzimatikus vizsgálati készítmények 25 stabilizálására ismeretessé vált SH-csoportokat tartalmazó anyagok, főként a gl utat ion felhasználása. (67 14 582 Hollandiai közzétételi irat, 12 89 668 Német Szövetségi Köztársaság-beli közzétételi irat) Az ilyen anyagok alkalmazása azonban nem teljesen kielégítő, mivel megállapít- TO ható, hogy bizonyos enzimek aktivitását a glutation gátolja, továbbá a hasonló célokra használhatónak minősített SH-rragensek, főként a glutation, oxidációérzékenyek, ezenkívül sok esetben túl drágák. Végül a glutation stabilizáló hatása sem bizonyult önmagában kielégítőnek. t>, Azt találtuk, hogy a vázolt nehézségek polivinil-pirrolidon alkalmazása esetén elkerülhetők. A találmány szerinti, stabilizált, kombinált, enzimatikus vizsgálati reagens, amely redukált, vag\ oxidált alakban nikotinsavamid- adenin- dinukleotidot és/vagy nikotinsavamidadenin- dinukleotidfoszfátot tartalmaz, azzal jellemezhető, hogy stabilizátorként polivinilpirrolidont tartalmaz. Ismeretessé vált ugyan a polivinilpirrolidon használata szervetlen komponensek elszublimálásának megakadályozására érzékeny anyagok fagyasztó-szárításánál. A fagyasztó szárítási segédanyagként kifejtett ismert hatás azonban alapvetően különbözik a kombinált enzimatikus vizsgálati készítményeknél a találmány szerint felismert stabilizáló hatástól, és így szakemberek számára teljesen meglepő. A találmány szerinti reagens-kombinációk polivinil- pirrolidon és NAD/NADH, illetve NADP/NADPH-on kívül célszerűen a reakciók lefolytatásához szükséges többi anyagot, mint enzimeket, koenzimeket, szubsztrátumokat, pufferanyagokat, segédanyagokat és adott esetben töltőanyagokat is tartalmaznak. Az alkalmas enzimekre példaként a következőket soroljuk fel: hexokináz, glükóz- 6-foszfát- dehidrogenáz, laktat- dehidrogenáz, malát- dehidrogenáz, glicerofoszfát- dehidrogenáz, triózfoszfát- izomeráz, piruvát-kináz, szorbit- dehidrogenáz, aldoláz, glutamát- oxálacetát- transzamináz, glicerinaldehid- 3- foszfát- dehidrogenáz és foszfoglicerinaldehidkináz. Ezenkívül számos más enzim is felhasználásra kerülhet. A megfelelő koenzimek közé pl. az adenozin- trifoszfát, foszfoadenilsavszulíát, adenozilmetionin, uridinfoszfát, citidinfoszfát, koenzim A, tetrahidrofolsav, biotin, tiaminpirofoszfát, piridoxálfoszfát, nikotinamid- mononukleotid, flavinmononukleotid, flavin- adenin- dinukleotid, sejtheminek és a B12- koenzim sorolható. Ide tartoznak továbbá a már említett közönségesen használt hidrogénátvivő koenzimek. mint az NAD/NADH és NADP/NADPH. 161592