161479. lajstromszámú szabadalom • Eljárás glutaminsav és/vagy aszparaginsav- komponenseket tartalmazó polipeptidek szintézisére
9 A dimetilformamid-oldatot bepároljuk, a maradékot éterrel eldörzsöljük, szűrjük, éterrel, 1 N citromsavoldattal, vízzel, 5%-os nátrium-bikarbonátoldattal, vízzel, s végül éterrel mossuk, szárítjuk. 95,02 g (84%) anyagot kapunk. Op.: 5 176—177°, R4f 0,44—0,57. [a] TM —30,8° (c = 1, dimetilf ormamidban). Analízisa: C43 H 67 0 14 N 7 (M: 906,022) képlet alapján: ' ' 10 Számított: C: 56,99%, H: 7,45%, N: 10,82%. Talált: C: 56,44%, H: 7,55%, N: 10,75%. 10. lépés: Z-Gln-Asp(OtBu)-Pro-Glu(OtBu)~ -Thr-Ser-Leu-NH2 előállítása 15 95,02 (105 mmol) Z-Asp(OtBu)-Pro-Glu(OtBu)-Thr-Ser-Leu-NH2-ot 1500 ml-es metanolos oldatban hidrogenolizáljuk csontszenes palládium jelenlétében. A reakció végén a katalizátort ki- „n szűrjük és az oldatot bepároljuk. A visszamaradó N-terminálisán szabad hexapeptid-származékot (R 2 f 0,33—0,44) feloldjuk 400 ml dimetilformamidban és hozzáadunk 58 g (126 mmól) karbobenzoxi-glutamin-2,4,5-triklórfenilésztert, 25 valamint 17,6 ml (126 mmól) trietilamint. Az aktív észter teljes feloldódásáig keverjük a reakcióelegyet, majd egy napi állás után bepároljuk. A maradékot éterrel eldörzsöljük, szűrjük, éterrel, 0,1 N sósavval, vízzel, 5%-os nátrium- 30 bikarbonátoldattal, vízzel, s végül ismét éterrel mossuk. Az így kapott nyersterméket 400 ml metanol és 800 ml forró víz elegyéből átoldjuk. Lassú hűtés után a kivált terméket szűrjük, 10%-os vizes metanollal mossuk, szobahőmér- 35 sékleten vákuumban szárítjuk. 86,7 g (80%) védett heptapeptidet kapunk. Op.: 169—174°, Rj. 0,47—0,56. [a] 2 °— 36,11° (c=l, dimetilformamidban). 40 Analízisa: C48 H 75 0 16 N 9 • H2 0 (M: 1052,168) képlet alapján: Számított: C: 54,78%, H: 7,37%, O: 25,85%, N: 11,98%. Talált: C: 54,68%, H: 7,49%, O: 25,80%, 45 N: 12,00%. 11. lépés: Z-Leu-Gln-Asp(OtBu)-Pro-Glu-(OtBu-Thr-Ser-Leu-NH<2 előállítása 50 72,65 g (70,2 mmól) Z-Gln-Asp(OtBu)-Pro-Glu(OtBu)-Thr-Ser-Leu-NH2 -ot 71 mmól tömény sósavat tartalmazó 730 ml dimetilf ormamidban hidrogenolizáljuk csontszenes palládium jelenlétében. A hidrogenolízis végén a ka- 5 g talizátort kiszűrjük, s az oldatot kb. 500 ml térfogatra pároljuk be (a szabad vegyület R^. értéke 0,06—0,11), s az alábbi vegyes anhidrid oldatához adjuk. 31,3 g (70,2 mmól) karbobenzoxi-leucin dicik- 60 lohexilammónium sót feloldunk 250 ml kloroformban, hozzáadunk 0,77 ml (7 mmól) N-metil-morfolint, s 100 ml dimetilformamiddal való hígítás és —10°-ra való hűtés után 9,26 ml (70,2 mmól) klórszénsav-izobutilésztert. Nyolc perc 65 10 keverés után a keletkezett szuszpenziót •—20°ra hűtjük, s egyesítjük a fenti, ugyancsak —20°ra hűtött oldattal, melyhez előzőleg 9,8 ml (70,2 mmól) trietilamint adtunk. Fél óra alatt a reakcióelegy hőmérsékletét hagyjuk 0°-ra emelkedni, egy órán át ezen a hőmérsékleten keverjük, majd éjszakán át állni hagyjuk. A reakcióelegy szűrése után az oldatot bepároljuk, a maradékot 1 N citromsavoldattal eldörzsöljük, szűrjük, citromsavoldattal, vízzel, 5%-os nátrium-bikarbonátoldattal, vízzel, éterrel mossuk, s szárítjuk. 69,2 g (88%) anyagot kapunk. Op.: 180— 183°, R j. 0,45—0,55. Analízisa: C54 H 86 O 17 N 10 (M: 1147,308) képlet alapján: Számított: C: 56,52%, H: 7,55%, N: 12,29%. Talált: C: 56,40%, H: 7,60%, N: 12,30%. 12. lépés: H-Leu-Cln-Asp(OtBu)-Pro-Glu-(OtBu)-Thr-Ser-Leu-NH2 előállítása 67,52 g (59,2 mmól) védett oktatpeptidamidot (11. lépés) 1100 ml metanolban szuszpendálva csontszenes palládium jelenlétében hidrogénezünk. A reakció végére az anyag feloldódik. A katalizátort kiszűrjük, a metanol-oldatot bepároljuk. A szilárd maradékot éterrel eldörzsöljük, szűrjük, éterrel mossuk. 54,6 g (91,2%) anyagot kapunk. Op.: 198—199°, Rj 0,28—0,32. [a]2 °— 39,7° (c=l, dimetilformamidban). Analízisa: C46 H 80 O 15 N 10 (M: 1013,18) képlet alapján: Számított: C: 54,52%, H: 7,95%, O: 23,68%, N: 13,82%. Talált: C: 54,29%, H: 8,09%, O: 32,72%, N: 13,72%. 13. lépés: Z-Phe-Leu-Gln-Asp(OtBu)-Pro-Glu-(OtBu)-Thr-Ser-Leu-NH2 előállítása 15,98 g (53,3 mmól) karbobenzoxi-fenilalanint feloldunk 130 ml dimetilformamidban és hozzáadunk 5,92 ml (53,3 mmól) N-metil-morfolint, majd —10°-on 7,04 ml (53,3 mmól) klórszénsavizobutilésztert. A vegyes anhidridet nyolc percig keverjük —10°-on, majd e hőmérsékleten hozzáadunk 54 g (53,3 mmól) oktapeptidamidot 350 ml dimetilformamidban oldva. A reakcióelegyet egy órán át hűtés mellett keverjük, majd szobahőmérsékleten állni hagyjuk éjszakán át. Másnap a csapadékos oldatot szűrjük, s a szűrletet bepároljuk. A maradékot 1 N citromsavoldattal eldörzsöljük, szűrjük, citromsavoldattal, 0,1 N sósavval, vízzel, 5%-os nátriumbikarbonátoldattal, vízzel, majd végül éterrel mossuk. Szárítás után 65,7 g anyagot kapunk, amit 700 ml etilacetáttal forralunk 5—10 percig. A szuszpenziót jégszekrényben tartjuk éjszakán át, kiszűrjük, etilacetáttal mossuk és szárítjuk. 63,6 g (92%) anyagot kapunk. Op.: 196—200°, R j 0,4—0,5. [a]^° —37,24° (c = 1, dimetilformamidban). 5
