161479. lajstromszámú szabadalom • Eljárás glutaminsav és/vagy aszparaginsav- komponenseket tartalmazó polipeptidek szintézisére

43 szenes palládium jelenlétében hidrogénezünk, majd a reakció végén a katalizátort kiszűrjük, az oldatot bepároljuk, acetonnal eldörzsöljük, szűrjük és szárítjuk. 1,5 g (92%) anyagot kapunk. EGlu

0,635 (glutaminsavra vonatkoztatott elektroforetikus mozgékonyság pH 9-en). A fenti anyagot 4 ml 50%-os vizes dimetilformamidban feloldjuk és reagáltatjuk a 12. példa szerint 0,37 g (0,535 mmól) védett tetrapeptidhidrazidból (5. példa) készített aziddal. A reakcióelegyből a végterméket 0,5 N kénsavval kicsapjuk és szűrjük, vízzel mossuk, szárítjuk. 1,55 g (90%) terméket kapunk. Aminosav analízis: Asp (2) 1,98; Thr (2) 1,93; Ser (2) 1,73; Glu (8) 8,2; Pro (2) 1,87; Ala (1) 1,00; He (1) 1,07; Leu (2) 2,04; Tyr (3) 2,91; Phe (3) 3,00; Lvs (2) 2,10; NH3 (3) 3,1. 16. példa: Z-Phe-Asp-Thr-Tyr-Glu-Glu-Phe-Glu-Glu-Ala-Tyr-Ile-Pro-Lys(BOC)-Glu(OtBu)-Gln-Lys(BOC)-NH2 előállítása 3,75 g (1,85 mmól) védett tridekapeptidamidot a 15. példában leírt módon dekarbobenzoxilezünk (E°glu

0,535). A kapott 3,13 g (90%) anyagból 3,05 g-ot (1,61 mmól) a 12. példában megadott módon acilezünk 1,5 g (2,16 mmól) védett tetrapeptidhidrazidból (5. példa) készített aziddal. A feldolgozás után 3,8 g (93%) anyagot kapunk. E°lu

0,65. Aminosav analízis: Asp (1) 0.98; Thr (1) 0,99; Glu (6) 6,05; Pro (1) 1,00; Ala (1) 1,00; lie (1) 1,00; Tyr (2) 1,98; Phe (2) 2,00; Lys (2) 2,02; NH3

(2) 2,05. 11. példa: ZN-His-Arg~Leu-His-Gln-Leu-Ala-Phe-Asp-Thr-Tyr-Glu-Glu-Phe-Glu-Glu-Ala-Tyr-Ile-Pro-Lys(BOC)-Glu(OtBu)-Gln-Lys-(BOC)-NH2 előállítása 1. lépés: H-Phe-Asp-Thr-Tyr-Glu-Glu-Phe-Glu-Glu-Ala-Tyr-Ile-Pro-Lys(BOC)-Glu(OtBu)~Gln-Lys(BOC)-NH2 előállítása 2,8 g (1,1 mmól) védett heptadekapeptidamidot a 15. példában leírt módon dekarbobenzoxilezünk. 2,4 g (90%) anyagot kapunk. Rj 0,25— 0,33. 2. lépés: ZN-His-Arg-Leu-His-Gln-Leu-Ala-NHNH2-4 TFA előállítása 2,4 g (2,0 mmól) védett heptapeptidhidrazidszármazékot (6. példa) 10 ml trifluorecetsavban 44 feloldunk, majd fél óra állás után éterrel kicsapjuk a védett heptapeptidhidrazid-trifluoracetátot. A csapadékot éterrel mossuk és szárítjuk. 3,0 g (100%) anyagot kapunk. R1

0,5—0,6. 5 3. lépés: ZN-His-Arg-Leu-His-Gln-Leu-Ala--NHNH-2 és H-Phe-Asp-Thr-Tyr-Glu-Glu-Phe-Glu-Glu-Ala-Tyr-Ile-Pro-Lys(BOC)-Glu(OtBu)-Gln-Lys(BOC)-NH2 kapcsolása 10 1,85 g (1,2 mmól) védett heptapeptidhidrazid-trifluoracetátot (2. lépés) a 12. példában leírt módon aziddá alakítunk, majd a reakcióelegy lúgosítása után hozzáadunk 1,4 g (0,578 mmól) hep-15 tadekapeptidamidot (1. lépés) és 0,33 ml (3,0 mmól) N-metil-morfolint 3 ml dimetilformamidban oldva. Éjszakán át állni hagyjuk, majd másnap a reakcióelegyet vízzel eldörzsöljük, a csapadékot vízzel mossuk. A vizes mosófolyadék sava-20 nyitásával 0,43 g amino-komponenst visszanyerünk. A csapadékot 10 ml 1 N citromsavoldattal elkeverjük, szűrjük, citromsav-oldattal és vízzel mossuk, szárítjuk. 1,3 g (96%) védett tetrakozapeptidamidot nyerünk. Rj. 0,80—0,87. R* 0,12— 25 0,28. 18. példa: ZN-His-Arg-Leu-His-Gln-Leu-Ala-Phe-Asp-Thr-Tyr-Glu-Glu-Phe-Glu-Glu-Ala-30 -Tyr-Ile-Pro-Lys(BOC)-Glu(OtBu)-Gln-Lys-(BOC)-Tyr-Ser-Phe-Leu-Gln-Asp-Pro-Glu-Thr-Ser-Leu-NH2 előállítása 1,3 g (0,34 mmól) védett oktakozapeptidami-35 dot (15. példa) a 15. példában leírt módon hidrogénezünk, majd a kapott, N-terminálisán szabad vegyületet (1,15 g, 92%; Rj 0,6—0,65) feloldjuk 2 ml dimétilf ormamid és 1 ml víz elegyében, mely 0,31 ml (2,21 mmól) trietilamint is 40 tartalmaz. 17. példa 2. lépésben leírt módon lehasítjuk a BOC védőcsoportot 0,8 g (0,65 mmól) védett heptapeptidhidrazid-származékról (6. példa), majd a kapott vegyülettel a 17. példa 3. lépésében leírt módon acilezzük a fenti amino-45 komponenst. 0,45 g amino-komponens regenerálása mellett 0,8 g (90%) védett pentatriakontapeptidamidot nyerünk. Rf

0,29—0,36 (etilacetát-piridin-ecetsav-víz — 90:20:6:11 rendszerben), Rf

0,28—0,35 (n-butanol-ecetsav-víz — 10:1:3 50 rendszerben). 19. példa: ZN-Glu-Pro-Val-Glu-Phe-Ala-His-Arg-Leu-His-Gln-Leu-Ala-Phe-Asp-Thr-Tyr-55 -Glu-Glu-Phe-Glu-Glu-Ala-Tyr-Ile-Pro-Lys--(BOC)-Glu(OtBu)-Gln-Lys(BOC)-NH2

előállítása 1,2 g (0,35 mmól) védett tetrakozapeptidamidot (17. példa) feloldunk 15 ml 80%-os ecetsav-60 ban, majd 2 g cink port adva hozzá egy órán át erősen keverjük. A p-nitrobenziloxikarbonil csoport lehasadását kromatográfiával követjük (etilacetát-piridin-ecetsav-ví z 90:20:6:11 rendszerben a szabad vegyület R^ értéke 0,10—0,15). 65 A redukció végén a cinket kiszűrjük, 80%-os 22