161479. lajstromszámú szabadalom • Eljárás glutaminsav és/vagy aszparaginsav- komponenseket tartalmazó polipeptidek szintézisére
* 5 származékot, melyet hidrogenolízis után a ZN-Leu-Ser-NHNH2 -ből készült aziddal acilezünk, s végül trifluorecetsavas vagy sósavas kezeléssel eltávolítjuk a hidrazid terc.-butiloxikarbonil védocsoportját. g Az 1—5 komponens előállításánál előbb a BOC-Phe-Pro-Thr-Ile-Pro-OH pentapeptidet készítjük el stepwise szintézissel vagy a BOC-Phe-Pro-Thr-NHNH2 és a H-Ile-Pro-OH fragmensek kapcsolásával. Ezután C-terminálisán 10 hidrazid- vagy valamilyen aktív észter csoportot alakítunk ki. A fenti sein tézis-komponensek összekapcsolását a találmány szerint egységesen, vizes dimetilformamidban végezzük. A dimetilformamid 15 víztartalmát a komponensek oldékonysága szerint változtatjuk. Az azidokat a szokásos módon dimetilformamidban vizes sósav és vizes nátrium-nitrit oldattal készíjük el,, majd ezeket a megfelelő amino-komponens valamilyen, pl. 20 trietilammónium-sójának vizes dimetilformamidös oldatával reagáltatjuk. Ilyen módon pl. a fent leírt komponensek felhasználásával előállíthatjuk az 50—67, 44—67, 40—67, 33—67, 27—67 stb. 1—67, illetve 44—56, 40—56, 33—56, 25 27—56 stb. 1—56 polipeptideket, részben védett vagy szabad peptidamid formában. A találmány foganatosítására az alábbi kiviteli példákat adjuk meg. Példák A példában a rétegkromatográfiához használt alábbi oldószer elegyeket az R^. érték kitevőjében jelöljük 35 1 — etilacetát-piridin-ecetsav-víz — 60:40:12:22 2 — etilacetát-piridin-ecetsav-víz — 60:20: 6:11 3 — etilacetát-piridin-ecetsav-víz — 60:10:3 :5,5 4 — etilacetxt-piridin-ecetsav-víz — 120:10:3,5: :5,5 40 5 — kloroform-metanol — 9:1 6 — kloroform-metanol — 98:5 7 — kloroform-metanol — 98:2 8 —kloroform-aceton — 7:3 9 — kloroform-aceton — 9:1 4R 10 — kloroform-metanol-víz — 60:38:10. A példákban a hőmérséklet értékeit Celsius fokokban tüntetjük fel. A) A HGH 1—67 fragmens szintézis-kompo- ... nenseinek előállítása 1. példa: H-Tyr-Ser-Phe-Leu-Gln-Asp-Pro-Glu-Thr-Ser-Leu-NH2 előállítása 1. lépés: U-Leu-NH.2 előállítása 540 ml vízmentes metanolban feloldunk 107,6 g (593 mmól) leucinmetilészter-klórhidrátot, s az oldatot előbb 0°-on ammónia gázzal telítjük, majd ledugaszolva három napon át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A metanolos oldat 60 bepárlása után nyert maradék 800 ml vízmentes kloroformos szuszpenzióján ammónia gázt buborékoltatunk át erős keverés mellett három órán keresztül, majd szűrjük, kloroformmal mossuk és az oldatot bepároljuk. A kristályos 65 6 maradékot éterrel eldörzsöljük, szűrjük, éterrel mossuk és szárítjuk. 60,7 g (78,5%) anyagot kapunk. Op.: 96—98°, R* 0,28—0,35 • [á\j° + 6,2° (c=2, vízben). Analízis a: C6 H 14 ON 2 (M: 130,188) képlet alapján: Számított: C: 55,35%, H: 10,85%, O: 12.32%, N: 21,52%. Talált: C: 55,40%, H: 11,00%, O: 12.37%, N: 21,47%. . 2. lépés: Z-Ser~Leu-NH2 előállítása 105,5 g (443 mmól) karbobenzoxi-szerint feloldunk 1000 ml tetrahidrofuránban és —10°-on előbb 48,8 ml (443 mmól) N-metilmorfolint, majd 57,7 ml (433 mmól) klószénsav-izobutil-észtert adunk hozzá. Nyolc perc keverés után —20°ra hűtjük és. ezen a hőmérsékleten lassan hozzácsurgatjuk 57,6 g (443 mmól) leucinamid 700 ml kloroformos oldatát. A reakcióelegy hőmérsékletét fél óra alatt 0°-ra hagyjuk felmelegedni, majd egy órán át 0°-on tartjuk, s végül éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A kivált anyagot 500 ml metanol segítségével oldjuk, s az oldatot bepároljuk. A maradékot feloldjuk 2000 ml etilacetátban, mossuk 0,25 mól kálium-szeszkvikarbonát-oldattal, vízzel, 1 N sósavval és vízzel. A megfelelő mosófolyadékok egyesítése után azokat 100—100 ml etilacetáttal extraháljuk, majd az etilacetátos oldatokat egyesítés után szárítjuk és bepároljuk. A szilárd géles maradékot 450 ml piridin és 1700 ml diizopropiléter elegyéből kristályosítjuk. 140 g (90%) anyagot kapunk. Op.: 180—181°, R* 0,67—0,75 • [a] ^° +3,68° (c=l, dimetilformamidban). Analízis a: C17 H 25 0 5 N 3 (M: 351,394) képlet alapján: Számított: C: 58,15%, H: 7,15%, O: 22,8 %, N: 11,96%. Talált: C: 58,17%, H: 7,17%, 0: 22,63%, N: 12,00%. 3. lépés: H-Ser-Leu-NH2 -(COOH) 2 előállítása 1100 ml metanolban oldott 110 g (313,5 mmól) Z-Ser-Leu-NH2 -ot 11 g csontszenes palládium jelenlétében hidrogénezünk. A reakció végén a katalizátort kiszűrjük, metanollal mossuk és a metanolos oldatot 28,25 g (313,5 mmól) vízmentes oxálsav hozzáadása után bepároljuk. Á maradékot 100 ml metanol, 400 ml aceton elegyéből kristályosítjuk. 88 g (91,5%) anyagot kar punk. Op.: 183—185°, Rj 0,28—0,36• [a]^° —6,45° (c=l, dimetilformamidban). Analízis a: CH H 21 0 7 N 3 (M: 307,302) képlet alapján: Számított: C: 42,99%, H: 6,88%, O: 36,44%, N: 13,65%. Talált: C: 42,98%, H: 6,64%, O: 36,44%, N: 13,67%. 3
