161479. lajstromszámú szabadalom • Eljárás glutaminsav és/vagy aszparaginsav- komponenseket tartalmazó polipeptidek szintézisére
161479 39 40 g (75%) nyersterméket kapunk. R^ 0,3—0,4 és 2. lépés: Z-Pro-Thr-Ile-Pro-OH előállítása 11. példa: BOC-Phe-Pro-Thr-Ile-Pro-NHNH2 előállítása 1. lépés: H-Thr-Ile-Pro-OH előállítása Számított: C N Talált: C N 10 szennyezés 0,42—0,45. Az ilyen módon nyert védett oktapeptid-származékot 20 ml tetrahidrofuránban szuszpendáljuk és sósav gázt vezetünk 5 be, amíg az anyag feloldódik. Ezután az oldatot bepároljuk és a maradékot éterrel eldörzsöljük, szűrjük, éterrel mossuk, szárítjuk, 2,8 g (98%) nyersterméket kapunk. R^ 0,15—0,25 és szennyezés 0,42—0,45. Szilikagél oszlopon etilacetát-piridin-ecetsav-víz (60:20:6:11) elegyben kromatografálva 1,7 g (61%) tiszta termékhez jutunk. R2 0,15—0,25. Op.: 158—161°. Analízisa: C49 H 73 0 16 N 15 (M: 1128,194) képlet 15 alapján: Számított: C: 52,16%, H: 6,52%, N: 18,62%. Talált: C: 52,00%, H: 6,62%, N: 18,57%. 20 25 2,94 g (8,92 mmól) szabad tripeptidet (1. lépés), 3,33 g (9 mmól) karbobenzoxi-prolin-p-nitrofenilésztert és 1,25 ml (8,92 mmól) trietilamint 18 ml vízmentes tetrahidrofuránban oldódásig keverünk, majd éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Másnap az oldatot bepároljuk és a maradékot feloldjuk 50 ml etilacetátban, ezt mossuk 3x8 ml 1 N sósavval, majd 3x8 ml vízzel, s végül az etilacetátos oldatot bepároljuk. A maradékot oldjuk 135 ml metanol-n.butanol-víz (1:1:1) elegyében, s az 1. példában megadott módon tisztítjuk Dowex 1x2 ioncserélő oszlopon. A védett tetrapeptidet tisztán tartalmazó frakciókat egyesítés után bepároljuk, a maradékot petroléterrel eldörzsöljük, szűrjük, szárítjuk. 3,5 g (70%) anyagot kapunk. Rj. 0,4—0,5. [a]TM— 72,9° (c=l, dimetilformamidban). Analízisa: C28 H 40 O 8 N 4 (M: 560,632) képlet alapján: 7,5 g (26,6 mmól) izoleucil-prolint (2. példa 6. lépés), 14 g (27,9 mmól) karbobenzoxi-treoninpentaklórfenilésztert és 3,72 ml (26,6 mmól) tri- 30 etilamint feloldódásig keverünk 50 ml vízmentes piridinben. Oldódás után fél órás időközökben három részletben hozzáadunk 3,9 ml (27,9 mmól) trietilamint, majd másnapig állni hagyjuk szobahőmérsékleten. Másnap a piridint le- 35 desztilláljuk, az olajos maradékot feloldjuk 100 ml etilacetátban és a védett peptidet 5x20 ml 10%-os nátrium-karbonát-oldattal kivonjuk. Az egyesített vizes oldatokat savanyítjuk és a kivált olajat 3x20 ml etilacetáttal kivonjuk. Az 40 etilacetátos oldat bepárlása után kapott maradékot feloldjuk 450 ml metanol-n.butanol-víz (1:1:1) elegyben és 400 g Dowex 1x2 acetát-ciklusú ioncserélőből készített oszlopra visszük. Az oszlopot előbb a fenti eleggyel (450 ml), majd 45 metanol-n.butanol-0,03 N ecetsav (1:1:1) elegyével (100 ml) mossuk, s végül az anyagot metanol-n.butanol-0,1 N ecetsav (1:1:1) elegyével eluáljuk. A védett tripeptidet tisztán tartalmazó frakciókat bepároljuk (Rj 0,31—0,41), feloldjuk 50 100 m metanolban és csontszenes paládium jelenlétében hidrogénezzük. A hidrogenolízis végén a katalizátort kiszűrjük, az oldatot bepároljuk. A maradékot etilacetáttal eldörzsöljük, szűrjük és etilacetáttal mossuk. Szárítás után 7 55 g (80%) anyagot kapunk. Rj. 0,43—0,51, R ^ 0,57—0,67. [a]2 ° —59,21° (c=l, metanolban). Analízisa: C15 H2 7 0 5 N3 (M: 329,390) képlet alapján: 60 54,69%, H: 8,26%, O: 24,28%, 12,75%. 54,47%, H: 8,60%, O: 24,32%, 12,79%. 65 Számított: C N Talált: C N 59,98%, H: 7,11%, O: 22,83%, 9,99%. 59,88%, H: 7,03%, O: 22,83%, 9,89%. 3. lépés: BOC-Phe~Pro-Thr-lle-Pro-OH előállítása 5,6 g (10 mmól) védett tetrapeptidet (2. lépés) 60 ml metanolban hidrogenolizálunk csontszenes palládium jelenlétében. A reakció végén a katalizátort kiszűrjük, az oldatot bepároljuk és etilacetáttal eldörzsöljük, szűrjük, etilacetáttal mossuk és szárítjuk. 4,06 g (95,5%) anyagot kapunk. R» 0,32—0,40, Rj° 0,31—0,41. A fenti szabad tetrapeptidből 2,45 g-ot (5,75 mmól) 3,09 g (6,03 mmól) terc.-butiloxikarbonil-fenilalanin-pentaklórfenilészterrel és 0,805 ml (5,75 mmól) trietilaminnal 22 ml vízmentes piridinben oldódásig keverünk, majd három részletben, félórás időközökben összesen 0,845 ml (6,03 mmól) trietilamint adunk hozzá. Ezt követően éjszakán át állni hagyjuk szobahőmérsékleten. Másnap az oldószert ledesztilláljuk, a maradékot oldjuk 50 ml etilacetátban és mossuk 3x7 ml hideg 1 N sósavval, majd 3x7 ml vízzel. Az etilacetát-oldatot szárítjuk magnézium-szulfáton, bepároljuk és a maradékot feloldjuk 90 ml metanol-n. butanol-víz (1:1:1) elegyben. Az oldatot 80 g Dowex 1x2 ioncserélőből készült oszlopon tisztítjuk az 1. lépésben leírt módon. A tiszta védett pentapeptidet tartalmazó frakciókat egyesítés után bepároljuk, s a maradékot éter-petroléter (1:3) elegyével eldörzsöljük, szűrjük, mossuk, szárítjuk. 3,12 g (80,5%) anyagot kapunk. Rji 0,36—0,46. [a]TM —64,5° (c=l, dimetilformamidban). Analízisa: C34 H 51 0 9 N 5 (M: 673,788) képlet alapján: Számított: C: 60,60%, H: 7,63%, O: 21,37%, N: 10,39%. 20
