161454. lajstromszámú szabadalom • Eljárás cisztintartalmú peptidek előállítására
SZABADALMI 161454 MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG LEÍRÁS jlßm^* Namzatközl osztályoz*«: mß^m C 07 c 103/52 w Bejelentés napja: 1969. V. 10. fCI-890) Elsőbbsége: Svájci elsőbbsége: 1968. V. 10. 6999/68. ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL Közzététel napja: 1972. III. 28. Megjelent: 1974.11.15. -Feltalálóik) dr. Kamber Bruno, dr. Rittel Werner, vegyészek, Basel, Svájc. Tulajdonos: Ciba-Geigy AG., Basel, Svájc. Eljárás císztartaimíi peptidek előállítására 1 A találmány tárgya új eljárás cisztintartalmú peptidek előállítására. A természetben különböző cisztintartalmú peptidek találhatók, melyekben a cisztin diszulfidhidja egy gyűrűben helyezkedik el, ilyenek pl. az Oxitocin, vazopresszinek, izotocin, rnezotoqin, növekedési hormon, tirokalcitonin, inzulin. Másrészt kapcsolódhat a cisztin diszulfidhidja egyenesláncú aminosavláncokkal is, mint pL az inzulin A- és B-gyűrűje közti két diszuflidhidnál, vagy glutation esetén. Már különböző eljárások ismertek az ilyen diszulfidhidakat tartalmazó peptidek előállítására. A diszulfidhidakat tartalmazó természetes peptideken kívül már nagy számú aktív analógot, pl. dezaminc-oxitocint, Ser*-Oxitocint, Asn4-oxitocint, Val*-Oxitocint, Tyr2 (0-metil)-oxitocint, Phe 2 -Arg 8 vazopressziní, Phe2 -Ly s* -vazopresszint, Phe s Orn* -vazopresszint, lie 3-Arg*-vazopresszint, Asn4-Lys s -vazopresszint is szintetizálnak. Az ismert eljárások szerint a diszulfidhid előállítása céljából mindenekelőtt a mindkét kapcsolandó ciszteingyököt tartalmazó aminosavsorból, amelyben a merkaptocsoportok pl. karbobenzoxi- vagy benzilgyökkel, vagy triltilcsoporttal védettek, a merkaptovédőcsoportokat lehasítják, a benzilgyököt pL nátriummal folyékony ammóniás közegben, a tritücsoportot pl. merkuriacetattal és kénhidrogénnel, vagy 10 n sósavval, majd a szabad merkaptocsoportokat tartalmazó peptideket pL 1,2-dijódetánnal vagy oxigénnel diszulfiddá oxidálják. Ennek az eljárásnak az a hátránya, hogy az említett hasítási eljárások mellékreakciókat okoznak, elsősorban az érzékeny peptideknél, és a termelést ennek megfelelően csökkenti. Ugy találtuk, hogy a eisztin-tartalmú peptideket és származékaikat egyszerűbb és óvatosabb módon és jobb termeléssel kapjuk, ha a kötendő ciszteingyököket tartalmazó aminosavsort vagy sorokat, mely(ek)ben a mer^kaptocsoportok tritilgyökökkel védettek, jóddal kezeljük. A 15 reakció szobahőmérsékleten végbemegy, de a peptid természetétől függően végrehajtható alacsonyabb vagy magasabb hőmérsékleten, pL 0 és 60 C° között is. A reakciót előnyösen olyan oldószerben végezzük, melyben a jód és és a peptid 5 legalábbis részben oldódik, előnyösen alkoholban, pl egy rövidszénláncú alifás alkoholban, mint pl. etanolban vagy leginkább metanolban, vagy alkohol és egy olyan szerves oldószer elegyében, melyben a peptid oldható, ilyen szerves oldószer pL az etilacetát, dirnetílformamid vagy metilén'0 klorid, illetve jégecetes közegben. Célszerűen jódfelesleget biztosítunk pL úgy, hogy híg oldatban dolgozunk és a peptidoldatot adjuk a jódoldathoz. így kizárólag a kívánt monomereket kapjuk. Ha viszont fordítva járunk el, pL a jódoldatot csepegtetjük a peptid oldatba, jelentős mennyiségű polimer keletkezik. A keletkezett oldatból a jódfelesleget pL tioszulfáttal távolíthatjuk el. A reakciók során olyan peptideket használunk kiindulási anyagként, melyekben a szabad aminocsoportok célszerűen 20 védettek. Ha szükséges, a szabad hidroxil- és karboxilcsoportok is lehetnek védett alakban. Aminocsoport-védc csoportok, pL a benzil-, trifluörmetü-, ftaloil-, p-toluolszulfonü-csoport, vagy mindenekelőtt szénsavszármazék csoportok, pL adott esetben az aromás gyökben halogénatomokkal, 25 rövidszénláncú alkil-, rövidszénláncú alkoxi- vagy rövidszénláncú karbalkoxi-csoportokkal szubsztituált karbobenzoxi-csoportok, szines benziloxikarbonü-csoportok, pl. p-fenilazo-benzilpxikarbonil-' és p-(p'-metoxifenilazo)- benzioxikarbonil, toliloxikarbonil, 2-fenii-izopropiloxikarbonil-, 30 2-tolil-izopropiloxikarbonil- és mindenekelőtt a 2-p-difenilizopropiloxikarbonU-csoport (lásd az 1 554 051 sz. francia szabadalmi leírást), továbbá alifás oxikarbonilcsoportok, pL alliloxikarbonü-, ciklopentiloxikarbonil-, tercier amiloxikarbonil-, adamantiloxikarbonil- és elsősorban tercier butiloxi-35 karbonü-csoport. 161454
