161416. lajstromszámú szabadalom • Eljárás racém prosztaglandin-E-analógok előállítására
161416 45 46 kítjuk a megfelelő dimeziláttá, majd acetonnal és vízzel egy termékeleggyé, amelyet a 15. példában leírt módon elválasztva endo-6-(l-hidroxi-2-meziloxiheptil)-2-(6-karboxihex-2-in-a-ü)-biciklo[3.1.0]hexan-3-on-metilésztert, racém 5,6-dehidro-PGE2 -metilésztert és racém 5,6-debidro-15-epi-PGE2 -metilésztert kapunk. A 15. és 16. példa szerinti eljárást követjük és a 15. vagy a 16. példa szerinti acetilén-sorbeli biciklo[3.1.0]hexan-glikolészter reaktáns /3-izomerjét előbb a megfelelő dimezilátintermedierré, majd a megfelelő monomezilát-, racém 5,6-dehidro-8-izo-PGE2- és racém 5,6-dehidro-8-izo-epi-PGE 2 -/3,/S,/S-triklóretil- illetve -metilészterré alakítjuk át, melyeket a 15. példában leírt módon elválasztunk. Ugyancsak a 15. és a 16. példa szerinti eljárást követjük és az előbbiekben a 12. példa után meghatározott valamennyi acetilén-sorbeli endo- és exo-, x- és /S-glikol-^/^/S-triklóretil- és metilésztert átalakítjuk előbb a 15. és a 16. példa szerinti megfelelő intermedier dimezilát-termékké, majd a monomezilát-, a racém 5,6-dehidro-PGE2-típusú ós a racém 5,6-dehidro-PGE3 -típusú és a racém 5,6-dehidro- 15- epi - PGE2 -1 ípusíi -ß,ß,ß- triklóretil - és metilészterré, ezek valamennyien megfelelnek a 15. és a 16. példa szerinti három végtermék egyikének. 17. 'példa Racém PGE2 (S). 100 mg racém PGE2 -/S,/3, / 8-triklóretilószter 5 ml ecetsav —víz (9: Iv/v) eleggyel készült oldatához 400 mg cinkport adunk. Az elegyet nitrogén alatt 25 C°-on keverjük 2 órán keresztül. 1 térfogatrész 1 n sósav hozzáadása után 4 térfogatrész etilacetátot adunk hozzá. Az etilacetátos réteget elválasztjuk, vízzel, majd telített, vizes nátriumklorid-oldattal mossuk, szárítjuk és bepároljuk. A maradékot 15 g savval mosott szilikagélen (Silicar CC —4) kromatografáljuk, az eluálást 100 ml 50% etilacetátot tartalmazó, majd 100 ml 80% etilacetátot tartalmazó etilacetát-Skellysolve B eleggyel, végül 200 ml etilacetáttal végezzük és 20 ml-es frakciókat gyűjtünk. A 13. —18. frakciókat egyesítjük és bepároljuk, így racém PGE2 -t kapunk. Ennek mozgékonysága szilikagél lemezen és ezüstnitráttal impregnált szilikagél lemezen végzett vékonyréteg kromatográfia szerint, valamint színe (vanillin-foszforsav spray) ugyanaz, mint az optikailag aktív PGE2 -é; NMR-csúcsok és az infravörös abszorpció (diklórmetános oldatban) is ugyanaz, mint az optikailag aktív PGE2 -é; tömegspektrum csúcsok 316, 298, 279 és 190 értéknél. 18. példa Racém 15-epi-PGE2 (R). A 17. példa szerinti eljárást követve a racém 15-epi-PGE2 -/?,/?,/?-triklóretüésztert átalakítjuk 15-epi-PGE2 -vé; NMR-csúcsok 5,8-5,6 (multiplett), 5,6-5,3 • (multiplett), 4,5-3,9 (multiplett) és 0,9 (triplett) ö-nál. 19. példa Racém 5,6-dehidro-PGE2 (S). 28 mg racém S^-dehidro-PGEa-ß^/S-triklor-5 etilészter 1,5 ml ecetsav — víz (9 :lv/v) eleggyel készült oldatához 150 mg cinkport adunk. Ezt a keveréket 2 órán át 25 C°-on nitrogén alatt keverjük. Ezután 4 térfogatrész etilacetátot adunk hozzá. Az etilacetátos fázist 1 n sósavval, majd 10 telített, vizes nátriumklorid-oldattal mossuk, szárítjuk és bepároljuk. A maradékhoz benzolt adunk, majd ezt csökkentett nyomáson elpárologtatjuk. A maradékot 5 g savval mosott szilikagélen (Silicar CC —4) kromatografáljuk, az eluálást 100 ml 75% 15 etilacetátot tartalmazó Skellysolve B-vel, majd 100 ml etilacetáttal végezzük és 10 ml-es frakciókat gyűjtünk. A 8.—11. frakciókat egyesítve ós bepárolva 21 mg kristályos racém 5,6-dehidro-PGE2 -t kapunk; o. p. 85-90C0. Etilacetát és 20 Skellysolve B elegyből végzett kétszeri átkristályosítás után az anyag olvadáspontja 89— 91 C°, tömegspektrum csúcsok 332, 314, 296, 261 és 24a értéknél. 25 20. példa Racém 5,6-dehidro-15-epi-PGE2 (R). A 19. példa szerinti eljárást követve a racém 5,6-dehidro-15-epi-PGE2 -/S,/?,/S-triklóretilésztertát-30 alakítjuk 5,6-dehidro-15-epi-PGE2 -vé. A 17. és a 19. példa szerinti eljárást követjük és a racém-PGE2 -, a racém 15-epi-PGE 2 -, a racém* 5,6-dehidro-PGE2 - és a racém 5,6-dehidro-15-epi-PGE2 -/?,/?,/S-triklóreti]észterének/?-izomerjét rendre 35 átalakítjuk racém 8-ízo-PGE2 -vé, racém 8-izo-15-epi-PGE2 -vé, racém 5,6-dehidro-8-izo-PGE 2 -vé, illetve racém 5,6-dehidro-8-izo-15-epi-PGE2 -vé. Ugyancsak a 17. példa szerinti eljárást követjük, és az előbbiekben a 14. példa után meghatározott 40 valamennyi racém PGE2 -típusú vegyület és racém 15-epi-PGE2 -típusú vegyület /?,/?,^-triklóretilészterét átalakítjuk a megfelelő racém PGE2 -típusú savvá és a megfelelő racém 15-epi-PGE2 -típusú savvá, a megfelelő 8-izo-savakat is beleértve. 45 Ugyancsak a 19. példa szerinti eljárást követjük és az előbbiekben a 16. példa után meghatározott valamennyi racém 5,6-dehidro-PGE2 -típusú vegyület és 5,6-dehidro-15-epi-PGE2 -típusú vegyület /?,/S,/?-triklóretilészterét átalakítjuk a megfelelő 50 racém 5,6-dehidro-PGE2 -típusú savvá és racém 5,6-dehidro-15-epi-PGE2 -típusú savvá, a 8-izo-savakat is beleértve. 21. példa 55 Racém PGE2 A. Enzim készítése. Táptalajt készítünk, amely 2% kukoricalekvárt (cerelóz és glükóz egyenlő részarányú keveréke) 60 tartalmaz csapvízben. Ennek pH-ját sósav hozzáadásával 4,5-re állítjuk be és 1% metiloleátot adunk hozzá. 4 darab 500 ml-es lombikot, melyek a fenti táptalajból 100— 100 ml-t tartalmaznak beoltunk Cladosporium resinae-vel (Cl-11, ATCC 65 11, 274) és rázógépen szobahőmérsékleten (körül-23
