161356. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antigén anyag és élő vírusvakcína előállítására a Marek-féle baromfibetegség vírusából

161356 13 4. példa Kísérletek a „Frant 2" törzzsel Ezt a „Frant 2" jelzésű nagyon patogén törzset először 3 passzázs során 3. tápfolyadékkal csirkevesesejtekhez adaptáltuk, majd a 2. és 3. tápfolyadék használata mellett csirkeembrió fibroblaszt elsődleges tenyészeteken további 15 passzázs során a törzset attenuáltuk. Megállapítottuk, hogy a törzs tökéletesen elvesztette „A"antigénjét, apatogén és immunogén volt, és a már leírt próbák tanúsága szerint megbízhatóan alkalmasnak találtuk vakcinák előállítására. 5. példa A Marek-féle betegség JM törzsét csjrkevese,, sejtekben (3 passzázs, 1. tápfolyadék használatával), majd kacsa fibroblasztokban (3 passzázs) a 3. tápfolyadék használatával attenuáltuk. Végül a törzset 15—18 passzázson csirkeembrió fibroblaszt sejteken vezettük át, 2. tápfolyadék felhasználásával. Az így nyert attenuált törzs A-antigéntől mentesnek és igen tisztának bizonyult. Leucosis ágensektől és más szennyező anyagoktól, amelyek néha a csirkevesében jelen vannak, egymást követő kacsa- és csirkefibroblaszt passzázsok szelektáló hatása révén szabadítottuk meg. A törzset a 2, példában részletezett eljárásokkal vizsgáltuk meg, és az vakcinatermelésre igen alkalmasnak bizonyult. 6. példa Az 5. példában leírt módszert követtük, hogy attenuált változatokat nyerjünk a GA, CAL—1 és a CONN—A törzsekből. Mindezeket az attenuált vírusokat vakcinává dolgoztuk fel. 7. példa Ebben a példában az 1. példában leírtak szerint előállított vakcina használatával végzett több széleskörű kísérletet írunk le. Egynapos és háromhetes csirkéket vakcináztunk hasüregbe (intra-peritoneálisan) a HPRS 16 attenuált törzs egyetlen adagjával. Minden csirke 0,2—1,0 ml vakcinaadagot kapott. A csirkéket 235 napon át a gyakorlatban szokásos körülmények között tartottuk. A Marek-féle betegség és más nem részletezett betegségek, különösen a kokcidiózis előfordulását a vakcinázott csirkékben és nem vakcinázott kontroll csoportokban a következő táblázatokban adjuk meg: 1. kísérlet: 14 2. kísérlet: Napos korban 3 hetes korban Nem vakcinázott vakcinázott Összes állatlétszám 1250 1250 25Ö0 összes 10 15 20 25 39 35 40 45 50 Napos korban 3 hetes kdrban Nem 55 vakcinázott vakcinázott mortalitás 18 1,44% 19 1,52% 67 2,68% Marek-féle betegségben elhullott 1 0,08% 1 0,08% 7 0,28% Egyéb betegségekben elhullott 17 1,36% 18 1,44% 60 2,4 % 3. kísérlet Összes állatlétszám 1000 1000 2000 Összes mortalitás 5 0,05% 8 0,08% 42 2,1 % Marek-féle 60 betegségben elhullott 0 0,0 % 0 0,0 % 17 0,85% Egyéb betegségekben elhullott 5 0,05% 8 0,08% 25 1,25% 65 3 hetes korban vakcinázott Nem vakcinázott Összes állatlétszám összes mortalitás Marek-féle betegségben elhullott Egyéb betegségekben elhullott 4. kísérlet: 879 2700 29 3,24% 443 16,4% 9 1,03% 115 4,3% 20 2,21% 328 12,1% 3 hetes korban vakcinázott Nem vakcinázott Összes állatlétszám Összes mortalitás Marek-féle betegségben elhullott Egyéb betegségekben elhullott 900 6100 36 4% 1789 29,3% 12 1,33% 1076 17,6% 24 2,67% 713 11,7% Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás antigén anyagnak és azt tartalmazó, a Marek-féle betegség ellen védő élő vírusvakcinának az előállítására a Marek-féle betegség vírusából azzal jellemezve, hogy madársejteket beoltunk a Marek-féle betegség vírusának egy — előnyösen sejthez kötött — patogén alakjával, ezt a vírust egy vagy több madársejtféleségben az A-antigént kimutató próbával ellenőrizve A-antigéntől mentessé passzáljuk, amikor is előnyösen összesen legalább 20 passzálást végzünk, majd adotf esetben az így kapott, antigén anyagot alkotó, sejthez kötött attenuált élő vírust oltó törzsanyagként felhasználva az attenuáláshoz használttal azonos vagy ahhoz ha. sonló egy vagy több sejtféleségben továbbtenyésztjük, és végül A-antigéntől mentes, parenterálisan alkalmazható élő vírusvakcinává készítjük ki. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy a passzálást csirke- vagy kacsasejtekben végezzük. 3- A 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy a passzálást vesesejtekben végezzük. 4. A 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy a passzálást fibroblasztokban végezzük. 5. Az 1—4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy a vírust előbb csirkeembrió vesesejtjeiben passzáljuk, majd . csirke- és/vagy kacsaembrió fibroblasztokban folytatjuk a passzálást. /