161282. lajstromszámú szabadalom • Eljárás trigliceridek enzimatikus, kvantitatív meghatározására
MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALALMÄNtl fflVATÁL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1970. XII. 30. (BO—1269) Német Szövetségi Köztársaság-beli elsőbbsége: 1970.1.2. száma: P 20 00 127.8 Közzététel napja: 1972. III. 28. Megjelent: 1973. XII. 31. 161282 Nemzetközi osztály: C 11 c 1/00 ^ ír r ". 4 .*, %• Feltalálók: Dr. Stork Harald, orvos, Lampetheim, Dr. Schmidt Felix Helmut, biokémikus, Mannheim-Seckenheim, Német Szövetségi Köztársaság Képviselő: Budapesti Nemzetközi ÜMK Tulajdonos:., Bpehringer Mannheim GmbH, Mannheim, Német Szövetségi Köztársaság Eljárás trigliceridek enzimatikus, kvantitatív meghatározására A találmány tárgya eljárás lipoproteinhez kötött és/vagy proteinmentes zsírsavakkal oldatban levő trigliceridek enzimatikus, kvantitatív meghatározására. Mind az arteriosklerózis kutatásában, mind a klinikai és farmakológiai rutin vizsgálatoknál jelentős szerepe ván a trigliceridek kvantitatív meghatározásának, különösen azokénak, amelyek hipoproteihhez vannak kőzve. A már hosszú ideje ismert eljárásoknak technikailag különböző hátrányaik vannak és ebből kifolyólag kevéssé specifikusak és csekély az analízis pontossága. Az utóbbi időben érvényesült általánosságban a trigliceridek enzimatikus meghatározása, kiváló specifikusságuk és találati biztonságuk alapján. [L.: Klin Woehenschr. (1962) 40, 362. oldal és Klin. Chemie (1968) 6, 156—159. oldal]. Az eddig szokásos eljárások esetében a zsírokat közvetlenül erős bázissal, pl. alkoholos kálilúggal hasították a zsírsavak sóivá és glicerinné, majd a folyadékban keletkezett glicerint a zsírsav részek leválasztása után (pl. leválasztva majd centrifugálva) ismert módon enzimatikusan pyruváttá alakították. Az eredeti glicerintartalommal ekvivalens pyruvát mennyiséget végül NADH-n keresztül (a nikotinamid-adenin-dinukleotid vagy difoszfopiridin-nukleotid redukált alakja) laktátdehidrogenázzal tejsavvá alakították át, amikor is a f otometrikusan mérhető NADH felvétel a glicerintartalöm közvetlen mértékét jelenti. Dacára annak, hogy a módszer jelentősén előrehaladást jelent, a zsírok elszappanosítása még mindig idŐtrabló és munkaigényes folyamat mivel kvantitatív reakció csak félórás etilalkoholos kálilúggal hevítés után érhető el, ezenkívül az is szükséges, hogy a keletkezett zsírsavas káliumsót egy további lépésben magnéziumszulfáttal magnéziumsóként csapják ki és a keletkezett csapadékot pl. centrifugálással eltávolítsák. Azok a kísérletek, hogy már a zsírbontás első lépését is enzimatikusan végezzék, meghiúsultak, lényegében három okból: 1. A lipoprotein-kötésű trigliceridek a lipoproteid-lipázzal hasíthatok. Ezek azonban csak emberi vagy állati szövetből nyerhetők, stabilitásuk kicsi és olyan nagy a protein tartalmuk, hogy az zavarja a fotometikus NADH meghatározást. Ezenkívül még hosszú inkubációs időnél is tökéletlen a bomlás. !. Az emuigeált semleges zsírok lipázokkal — amelyek a pankreátból származnak — lépcsőzetesén di- és monogliceriden át a szabad zsírsavakká és glicerinné hasíthatok, míg a részleges bontás csak a monogliceridhez vezet. A találmány szerinti meghatározási módszer csak akkor való-30 sítható meg, ha a bomlás kvantitatív és 10 15 20 25
