161252. lajstromszámú szabadalom • Eljárás csökkent allergén hatású penicillinek előállítására

161252 19 20 nicillinacüáz vizes oldatával történő enzimes lebontásával, az így előállított 6-aminopenicillánsav enzimes vagy kémiai acilezésével, az enzim előállítását az Escherichia coli tenyésztésével kapott fermentléből, adott esetben a mikro- 5 organizmus elölése után végezve, azzal jellemezve, hogy a fermentlevet öntisztító centrifugális szeparátorban 0 és 50 C° közötti szabályozott hőmérsékleten egy 0,1—1,5 mm széles, illetve átmérőjű centrifugagolyórésen 10 vagy — lyukon át legalább 34 kg/cm2 és legfeljebb 136 kg/cm2

centrifugális nyomás hatására nagy sebességgel megszakításokkal kilövellj ük, a kilövellt sejtanyagot az enzim oldására és az inaktív sejtanyagból való extrahálá- 15 sara, adott esetben egy bázis jelenlétében, 0,1— 5 óra hosszat 10—50 C°-os vízben keverjük, az extrahált enzimet adott esetben tisztítása után a vizes oldatból elkülönítjük, és ismét vízben oldjuk, majd az így kapott sejtmentes vizes pe- 20 nicillináz oldatot, adott esetben ismert módon egy aktív polimer anyaggal való lekötése után, ismert módon természetes penicillinek enzimes lebontására alkalmazzuk, és az így nyert 6-aminopenicillánsavat enzimes vagy kémiai úton is- 25 rnert módon acilezzük. (Elsőbbsége: 1968. február 15.) 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a mikroorganizmus elölésére a fermentléhez víz- 30 zel kevéssé elegyedő szerves oldószert, nevezetesen butilacetátot, izobutilacetátot vagy amilacetátot adunk. (Elsőbbsége: 1968. február 15.) 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, ^5 «hogy az enzimet a kilövellt sejtanyagnak vízzel való keverése közben egy vízzel nem elegyedő szerves oldószernek, nevezetesen metilizobutilketonnak, butilacetátnak, izobutilacetátnak, amilacetátnak, benzolnak, toluolnak vagy kloroformnak 1—5% mennyiségben való hozzáadásával oldjuk. (Elsőbbsége: 1968. február 15.) 40 4. Az 1—3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy az extrahálást elősegítő bázis- 45 ként egy szervetlen bázist, előnyösen nátriumhidroxidot, káliumhidroxidot vagy ammóniát, vagy egy tercier szerves bázist, előnyösen trietilamint vagy N-etilpiperidint használunk. (Elsőbbsége: 1968. február 15.) o0 5. Az 1—4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az extrahált enzimet az enzim vizes oldatának és az abban visszamaradt inaktív sejtanyagnak 3,0—6,0 pH értékig való meg- 55 savanyításával, a kivált inaktív sejtanyag szűréssel való eltávolításával és a pH értéknek a visszaállításával tisztítjuk. (Elsőbbsége: 1968. február 15.) 6. Az 1—5. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy az extrahált enzimet sejtmentes vizes oldatából 4—6 pH értéknél, vasionokkal kelátot képző anyagok jelenlétében csersavval kicsapjuk, a képződött enzim-csersav komplexet szűréssel vagy centrifugálással elkülönítjük, és az enzimet adott esetben az elkülönített komplexnek 7—9 pH értékű vízben vagy 4—7 pH értékű víz-n-butanol keverékben való oldásával vagy az elkülönített, vízben szuszpendált komplexnek a csersavat megkötő dietilaminoetilcellulózzal való érintkezésbehozásával vizes oldatba visszük. (Elsőbbsége: 1968. december 3.) 7. Az 1—6. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy az extrahált enzimet 3,5—6 pH-ra beállított oldatban átbocsátjuk egy nyílt szerkezetű kationcserélő oszlopon, vagy a kationcserélőt hozzáadjuk keverés közben az enzimoldathoz, majd az ioncserélőt gyenge pufferoldattál, előnyösen 0,2 n ammóniumacetáttal vagy trihidroximetilammóniumacetáttal 6,0—8,0 pH értéken eluáljuk, és az acilázt kinyerjük. (Elsőbbsége: 1968. december 3.) 8. Az 1—7. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy az enzimoldatból a szervetlen és kis molekulasúlyú szennyezéseket vízzel szemben végzett dialízissel vagy az oldatnak 50 C° alatti hőmérsékleten 25—100 mg szárazanyag/ml koncentrációra való bepárlásával és azt követő gélszűréssel távolítjuk el. (Elsőbbsége: 1968. december 3.) 9. Az 1—8. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy a tisztított enzimet egy 'aktív, polimer anyaggal, előnyösen brómcianiddal kezelt poliszachariddal reagáltatva kémiailag módosítjuk és lekötjük. (Elsőbbsége: 1968. december 3.) 10. Az 1—9. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jelleme z v e, hogy a tisztított enzimet az enzimoldatnak —10 és +50 C° közötti hőmérsékleten végzett liofilizálásával vagy 10—55 C°-on való flotáló szárításával szilárd állapotban elkülönítjük. (Elsőbbsége: 1968. december 3.) 11. Az 1—10. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy természetes penicillinként benzilpenicillint használunk. (Elsőbbsége: 1968. február 15.) A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója Nyomda Zalaegerszeg 72 5717 — Felelős vezető: Pusztai ""László 10