161252. lajstromszámú szabadalom • Eljárás csökkent allergén hatású penicillinek előállítására
161252 15 16 megszűrtük. A szűrt oldatot 5 n sósavval 4,3 pH-ra megsavanyítva kivált a kristályos 6--aminopenicillánsav. A kristályokat szűrőre vittük; 2 ízben 5 ml hideg vízzel, majd 2 ízben 5 ml száraz acetonnal mostuk, és vákuumban megszárítva 8,51 g 6-aminopenicillánsavat kaptunk. A termék 99% tisztaságú volt, és az összes hozam benzilpenicillinre számítva 69%. Analóg módon készítettünk 6-aminopenicillánsavat az előző példák szerint készült enzimkészítmények felhasználásával. A hozamokat és a kapott sav tisztaságát az 1. táblázatban közöljük. 1. táblázat Benzilpeni cillin K-só, g E n z i m 6-aminopenicíllánsav Példa Benzilpeni cillin K-só, g példa gramm •E/g hozam g tisztaság % hozam, % 14b 21 3 6,3 1600 10,1 98,2 82 14c 21 4a 4,2 2920 9,8 96,0 78 14d 500 4b 450 800 261,3 98,5 89 14e 21 5 5,4 2340 7,55 97,0 60 14f 21 7a 145 87 9,9 100 81 14g 2100 7b 780 1610 1064 100 88 14h 21 7c 0,1 128000 9,3 98,0 75 14i 21 7d 0,11 116500 10,35 100 85 Hj 21 9b 5,4 2400 9,1 100 75 14k 21 10 2,4 6000 8,82 100 -72 141 21 9a 0,9 14000 9,23 100 76 15. példa 6-Aminopenicillánsav-p-nitrobenzilészter előállítása A 7b példa szerint kapott, 1610 E/g aktivitású enzimoldatból 18,6 g-ot 700 ml vízzel és 120 ml metanollal hígítottunk, és 0,1 mólos nátronlúggal 7,8 pH-ra állítottuk be. Hozzáadtuk 3,1 g (6,6 mól) p-nitrobenzil-benzilpenicillinátnak 60 ml metanollal készült oldatát. A keveréket 37 C°-on kevertük, miközben a pH értékét 0,1 mólos nátronlúg hozzáadásával 7,8-on tartottuk. 2,5 óra múlva a keveréket lehűtöttük, és 500 ml etilacetáttal extraháltuk. A savas réteget elkülönítettük, és további 250 ml etilacetáttal extraháltuk. A szerves rétegeket egyesítettük, és vízmentes nátriumszulfát fölött 1 óra hoszszat szárítottuk. A szűrés után a szerves oldatot két egyenlő részre osztottuk. Az egyiket szobahőmérsékleten vákuumban bepárolva 1,1 g szabad 6-aminopenicillánsav-p-nitrobenzilésztert kaptunk olajos maradék 'alakjában. A termék infravörös színképe 3250, 1756 és 1720 cm-1 hullámszámnál mutatott sávokat, ami NH2 -csoport, /?-laktámgyűrű és észter csoport jelenlétére mutat. 20 ml acetonban oldott 0,58 g benzolszulfonsavat hozzáadtunk az etilacetátos oldat másik részéhez, majd vákuumban kb. 30 ml térfogatra koncentráltuk az oldatot. 10 ml éter hozzáadása és éjjelen át hűtőszekrényben való állás után 0,8 g p-nitrobenzil-6-aminopenicillinát-benzolszulfonsav-só vált ki fehér kristályok alakjában 148—151 C° olvadásponttal. 16. példa elö-ZO 35 40 45 50 55 60 tó 6-(D-a-Azido-fenilacetamido)-penicillánsav állítása 283 g 42 E/g aktivitású enzimoldathoz hozzáadtuk 20 g benzilpenicillin káliumsójának 317 ml vízzel készült oldatát. A keveréket 37 C°-on inkubáltuk, miközben 2,5 n nátronlúgnak időnkénti hozzáadásával a pH értéket 7,8-on tartottuk. Hat óra elmúltával a 10,7 g 92%-os 6-aminopenicillánsavat tartalmazó reakciókeveréket megszűrtük. Az oldatot 5 C°-ra hűtöttük, és 10 n kénsav hozzáadásával 3,0 pH-ra megsavanyítottuk. Ezután keverés közben hozzáadtunk 62 mmól D-a-azido-fenilacetilkloridot tartalmazó 300 ml metilizobutilketont. A keverést 30 percig folytattuk, és a pH értéket 2,5 n nátronlúg időnkénti hozzáadásával 3,0-n tartottuk. A reakciókeveréket átszűrtük 10 g Celite 505-ön, és a metilizobutilketonos oidatot elválasztottuk á vizes fázistól. A metilizobutilketonos oldatot 25 g vízmentes nátriumszulfát fölött megszárítottuk. Szűrés után 41 ml metilizobutilketonos 2 n 2--etilkapronsavas nátrium oldat hozzáadásával a 6-(D-a-azido-fenilacetamido)-penicillánsavat nátriumsója alakjában kiválasztottuk. A 6-(D-ot-azido-fenilacetamido)-penicillánsavas nátriumot szűrőn elválasztottuk, a kristályokat 50 ml metilizobutilketonnal mostuk, és 50 C°-on vákuumban megszárítva 16,5 g terméket kaptunk. A termék 96% tisztaságú volt, és az öszszes hozam benzilpenícillinre számítva 75%. Analóg módon, az előző példák szerint készült más enzimkészítményeket használva készítettünk 6~(D-a-azido-fenüaoetamido)-penicillánsavas nátriumot. A 2. táblázatban közöljük a hozamokat és a penicillin tisztaságát.
