161213. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pregnán- vagy androsztán sorbeli 3 béta-hidroxi-5,6-epoxiszteroidok mikrobiológiai átalakítására
161213 Acetdn-diizopropiléter elegyből átkristályosítva 211—212 °C olvadáspontú 6a,ll/?,21-trihidroxi-16a-metil-l,4-pregnadién-3,20-diont kapunk. £242=14 600. 11. példa 2 g S^-hidroxi-ö^ö/í-epoxi-tesztololakton 50 ml dimetilformamiddal készített oldatát 8 liter Arthrobacter simplex kultúrához adjuk, és az 1. pél- 10 15. példa dában megadott körülmények között 56 órán át fermentálunk. A szokásos feldolgozás után kapott 1,5 g olajos nyersterméket oszlopkromatográfiával, szilikagélen választjuk szét. Etilacetát-diizopropiléter elegyből átkristályosítva 254—258 °C olvadáspontú 6/3-hidroxi-l-dehidro-tesztololaktont kapunk. £243=16 000. lapon: 1:4 arányú benzol-etilacetát eleggyel futtatjuk. Rf: 0,37. A mintegy 70—80% átalakulási terméket tartalmazó extraktumot ezután a szokásos módon, oszlopkromatográfiás úton feldolgozzuk, és az elkülönített nyersterméket aceton-diizopropiléter elegyből átkristályosítjuk. 275 mg 6a-hidroxi-l,4-androsztadién-3,17-diont kapunk. Olvadáspontja: 257—259 °C. 15 12. példa A 2. példában megadott körülmények között 3,75 g 3/?-hidroxi-5a,6a,16a,17a-diepoxi-pregnán-20-ont fermentálunk 15 liter Bacillus lentus kultúrával. 29 óra alatt a kiindulási anyag teljesen átalakul. A szokásos feldolgozás után kapott 2,93 g nyersterméket etilacetátból átkristályosítva 227—230 °C olvadáspontú 6a-hidroxi-16a,17a-epoxi-l,4-pregnadién-3,20-diont kapunk. £242 = 14 500. 23. példa 3,75 g 3/?-hidroxi-21-acetoxi-5a,6a,16a,17ct-diepoxi-pregnán-20-ont Bacillus lentus fajjal fermentálunk a 2. példában megadott körülmények között. 26 óra alatt a kiindulási anyag teljesen átalakul. A szokásos feldolgozás után kapott 3,3 g nyersterméket ecetsav-diizopropiléter elegyből átkristályosítva 55—60 °C olvadáspontú 6a,-21-dihidroxi-16a,17a-epoxi-l,4-pregnadién-3,20--diont kapunk. £241=13 900. 14. példa Bacillus sphaericus ATCC 7055 liofilizált kultúráját hozzáadjuk 500 ml pH 7-re beállított steril, vizes tápoldathoz, amely 0,1% peptorit, 0,2% kukoricalekvárt, 0,5% glukózt és 0,5% élesztőkivonatot tartalmaz, és a kultúrát 48 órán át rázzuk 30 °C hőmérsékleten. A baktériumszuszpenzió 50 ml-ét azután egy 2 literes Erlenmeyer-lombikban hozzáadjuk 500 ml fenti öszszetételű tápoldathoz. 24 óra múlva a kultúrából 50 ml-es részeket veszünk ki és hozzáadjuk négy, Erlenmeyer-lombikba töltött, fenti összetételű és 500 ml térfogatú tápoldathoz. 6 órás rázás után minden lombikba 100 mg 3/?-hidroxi-5a,6a-epoxi-androsztán-17-ont adunk 5 ml dimetilformamidban oldva, és további 42 órán át rázzuk a lombikokat 30 °C hőmérsékleten. Azután a fermentlevet metil-izobutil-ketonnal kirázzuk. Az extraktumból kiveszünk egy mintát és standard 6aS-hidroxi-l,4-androsztadién-3,17-dionnal összehasonlítva vékonyréteg-kromatográfiásán vizsgáljuk. A mintát szilikagél Mycobacterium smegmatis ATCC 14 468 liofilizált kultúráját a 14. példa szerinti módon tenyésztjük. 400 mg 3/?-hidroxi-5a,6a-epoxi-androsztán-17-on szubsztrátumot fermentálunk 64 órán át. A vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálat szerint mintegy 50% 6a-hidroxi-l,4-androsztadién-3,17-dion keletkezik. A szokásos feldolgozás után 180 mg 6a-hidroxi-l,4-androszta-20 dién-3,17-diont kapunk. Olvadáspontja: 254—257 °C. 16. példa 25 A 2. példában ismertetett körülmények között 3,75 g 3/?,21-diacetoxi-5a,6a-epoxi-16a-metil-pregnán-20-ont Bacillus lentus-szal fermentálunk, 32 órás fermentációs idő után a nyers fermentációs oldatot metil-izobutil-ketonnal extra-30 háljuk, az extraktumot vákuumban bepároljuk és a maradékot szilikagél kromatográfiával és aceton-diizopropiléterből történő átkristályosítással tisztítjuk. 910 mg 6a,21-dihidroxi-16a-metil-l,4-pregnadién-3,20-diont kapunk, amelynek 35 olvadáspontja 207—209 °C. Szabadalmi igénypontok 40 1. Eljárás pregnán- és androsztán-sorbeli 6--hidroxi-3-keto-zJ1,4 -szteroidok előállítására, azzal jellemezve, hogy egy telített A-gyűrűt tartalmazó pregnán- vagy androsztán-sorbeli 3/?-hidroxi- vagy 3/?-aciIoxi-5,6-epoxiszteroidot 45 mint szubsztrátumot egy Bacillus-sal, Mycobacterium vagy Arthrobacter baktériummal fermentálunk, a képződött, adott esetben 21-dezacilezett 6-hidroxi-3-keto-<d1,4-szteroidot valamely vízzel nem elegyedő oldószerrel extraháljuk, 50 az extraktumot bepároljuk, és a terméket kristályosítással vagy kromatográfiai úton tisztítjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a szubsztrátumot Bacillus lentus MB 284 (ATCC 13805), 55 Bacillus sphaericus (ATCC 7055), Mycobacterium smegmatis (ATCC 14468) vagy Arthrobacterium simplex (ATCC 6946) baktériummal fermentáljuk. 60 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja 6a,13a-dihidroxi-3-oxo-13,17-szeko-l,4-androsztadién-17-sav-lakton előállítására, azzal jellemezve, hogy kiindulóanyagként 3/?,-13a-dihidroxi-5a,6a-epoxi-13,17-szeko-androsz-65 tán-17-sav-laktont alkalmazunk. 4
