161173. lajstromszámú szabadalom • Eljárás inzulin-származékok előállítására
J6H73 15 16 Eícm = 78 El0 /o 1 cm = 91 Cinkfartalom: 0,30% (polarográfiás meghatározás alapján) Ultraibolya spektrum (0,15 M vizey nátriumklorid-oldat és 0,1 n vizes nátriumhidroxid-oldat elegyében; az elegy klorid-ion koncentrációja 0,003 n): 1% Inflexió kb. 240 millimikronnál Maximum 309 millimikronnál Tudomásunk szerint e vegyületet a szakirodalomban eddig nem ismertették. B. lépés: (IA) általános képletű vegyület (R és Z egyaránt metil-csoportot jelent) káliumsójának előállítása. A só vízben oldódik, és gyengén asszociált, vagy disszociált formában van jelen 350 ml, 75:20:5 arányú fenol:víz:l n káliumhidroxid-oldat elegybe (az elegy pH-értéke = 8) 20 C°-on, közömbös gáz atmoszférában, keverés közben 7 g, az 1. példa A. lépésében előállított terméket adagolunk, majd az elegyet fénytől védve további 10 percig keverjük, végül 3 liter 20 C°-os acetonba öntjük. Az elegyet 15 percig fénytől védve állni hagyjuk, majd a folyadékfázis főtömegét dekantálással elkülönítjük, és a szuszpenziót centrifugáljuk. A csapadékot acetonnal és éterrel mossuk, argon-áramban szárítjuk, majd éjszakán át szobahőmérsékleten, vákuumban szárítjuk. 6,80 g nyers terméket kapunk. A nyers terméket acetonnal és éterrel mossuk, majd szárítjuk. 6,38 g (91%) vízben oldódó, disszociált vagy gyengén asszociált terméket kapunk, amely az R és Z helyén egyaránt metilcsoportot tartalmazó (IA) általános képletű vegyület káliumsója. Elemzés: Súlyveszteség vákuumban, 100 C°-on: 4,6%. Szulfáthamu: 9,6—9,9% (elméleti mennyiség 6 K-atomra: 8,35%) Szabad guanidin-tartalom: 3% Savval felszabadítható acetilaceton: 4,25% (2,9 mól/mól, a szolvatációt is figyelembe véve) Cinktartalom: 0,27% (polarográfiás elemzés alapján) Ultraibolya spektrum: a) 0,15 mólos vizes nátriumklorid-oldatban: Inflexió kb. 279 millimikronnál Ej^ =29 Inflexió kb. 285 millimikronnál E}°/° =36 1 cm Maximum 311 millimikronnál EWo =86 1 cm b) 0,15 mólos vizes nátriumklorid-oldat és 0,1 n vizes nátriumhidroxid-oldat elegyében (az elegy klorid-ion tartalma 0,003 n): Maximum 239 millimikronnál Ej cm =104 Maximum 309 millimikronnál El0 /o = 91 1 cm Cirkuláris dichroizmus (0,15 mólos vizes nátriumklorid-oldatban); 1% A E t/0 X10 3 222 millimikronnál = —166 1 cm 210—209 millimikronnál = —246 195—193 millimikronnál = +426 5 A termék szerkezete — az inzulinéhoz hasonlóan — részben helikoidális, A kromatográfiához felhasznált papírt 10%-os ecetsav-oldattal vagy n. butanol — ecetsav — víz 4:1:5 arányú elegyével impregnáljuk. A keverék 10 alsó fázisával impregnálunk, a felső fázis az oldószer vándorlásának elősegítésére szolgál. Az előhívás brómfenolkékkel történik. A kapott R <• értékeket összehasonlítjuk az inzulin megfelelő adataival. A termék R ^ értéke azonos az inzuli-15 néval. A nyomokban jelenlevő, az inzulin kismértékű denaturálódásából származó szennyezések R^. értéke nulla. A termék sósavas hidrolizátumának (a hidrolízist 6 n sósavoldattal 24 órán át 100 C°-on vé-20 geztük) kétdimenziós papírkromatogramján az arginin kivételével az inzulint felépítő valamenynyi aminosav, megjelenik, és kimutatható a hidroxi-2-dimetil-4,6-pirimidin. Tudomásunk szerint ezt a vegyületet a szak-25 irodalomban még nem ismertették. 2. példa (IA) általános képletű vegyület (R és Z egyaránt metil-csoportot jelent) káliumsójának előállítása heterogén fázisban. A só vízben oldódik, 30 és disszociált, vagy gyengén asszociált állapotban van jelen. A. lépés: (VI) általános képletű vegyület (R és Z egyaránt metil-csoportot jelent) káliumsójának és 35 (III) általános képletű vegyület (R és Z egyaránt metil-csoportot jelent) káliumsójának előállítása. A sóélegy vízben nem oldódik, és erősen asszociált molekula-aggregátumokat képez. 12,5 g káliumhidrogénkarbonátot, 75 ml vizet, 40 75 ml acetilacetont, 75 ml fenolt és 25 ml 95%-os alkoholt tartalmazó, kétfázisú elegybe közömbös gáz-atmoszférában, fénytől védve, erős keverés közben 2,5 g inzulint adagolunk be. Az elegy pH-értéke 8,6. Az elegyet 15 napon át 25 C°-on ke-45 verjük — a reakcióidő leteltével az elegy pH-értéke nem változik —, a kapott emulziót centrifugáljuk, a felső folyadékréteget elöntjük, és a maradékot spatulával eldörzsöljük. A felső folyadékréteget elkülönítjük, a csapadékot vízben 50 szétoszlatjuk, az elegyet 10 percig 20 C-on centrifugáljuk, majd a felső folyadékréteget elöntjük, a csapadékot vízben eldörzsöljük és ismét centrifugáljuk. R és Z helyén egyaránt metil-csoportot tartal-55 mázó (VI) általános képletű vegyület káliumsójából, és R és Z helyén egyaránt metil-csoportot tartalmazó (III) általános képletű vegyület káliumsójából álló, vízben nem oldódó, erősen asszociált molekula-aggregátumokat képező elegyet 60 kapunk. B. lépés: (VII) általános képletű vegyület (R és Z egyaránt metil-csoportot jelent) káliumsójának és (IA) általános képletű vegyület (R és Z egyaránt 65 metil-csoportot jelent) káliumsójának előállítása. 8
