161173. lajstromszámú szabadalom • Eljárás inzulin-származékok előállítására
161173 23 24 A. lépés: (V) általános képletű vegyület előállítása (Y, Z és R egyaránt metü-csoportot, X izopropilcsoportot jelent). A termék többé-kevésbé erős asszociátumokat képez. 5 1,5 g káliumhidrogénkarbonát, 9 ml víz, 7,5 ml fenol, 6 ml 95%-os etanol és 7,5 ml metil-5-hexán-2,4-dion elegyéhez keverés közben, szobahőmérsékleten, közömbös gáz atmoszférában 0,3 g, a 3. példában előállított hidroklorid-sót 10 adunk. A kapott kétfázisú oldatot 7 napig 25 C°-on keverjük, ezalatt az elegy pH-értéke változatlanul 7,8 marad. Az elegyhez 10 térfogatrész acetont adunk, centrifugáljuk, a csapadékot acetonnal, majd éterrel mossuk és nitrogénaram- 15 ban szárítjuk. A csapadékot 30 ml vízben felvesszük, és a kapott opálos oldatot (pH = 8,5— 8,7) éjszakán át 20 C-on 30 ml ionmentes vízzel dializáljuk. A kapott, 7,5—7,7 pH-értékű oldatot szűrjük, 0,1 Hgmm nyomáson fagyasztva szá- 20 rítjuk, majd a maradékot éjszakán át vákuumban szárítjuk. 226 mg terméket kapunk, amely az (V) általános képletű vegyület (Y, Z és R egyaránt metil-csoportot, X izopropil-csoportot jelent) káliumsója. A sóképzés csak részleges. A 25 termék többé-kevésbé erősen asszociált. B. lépés: (IB) általános képletű vegyület káliumsójának előállítása (Y, R és Z egyaránt metil-csoportot, X izopropil-csoportot jelent). A termék vízben 30 oldódik, és disszociált, vagy gyengén asszociált állapotban van jelen. Fenol, víz és 1 n vizes káliumhidroxid-oldat 75:20:5 arányú elegyében (10,3 ml, pH = 8) 155 mg, a 6. példa A. lépésében előállított terméket 35 oldunk, és az oldathoz közömbös gáz atmoszférában, 20 C°-on 103 ml acetont adunk. A csapadékot centrifugálással elkülönítjük, acetonnal, majd éterrel mossuk, nitrogénáramban szárítjuk, végül vákuumban szárítjuk. 135 mg színtelen, 40 por alakú, vízben és fiziológiás szérumban oldódó, disszociált vagy gyengén asszociált állapotban jelenlevő terméket kapunk, amely az Y, R és Z helyén metil-csoportot és X helyén izopropilcsoportot tartalmazó (IB) általános képletű ve- 45 gyület káliumsója. Hozam: 87%. Elemzés : Összegképlet: C280 H 405 O 78 N 65 S 6 K c = 6356,5 Szulfáthamu: 6,4% (elméleti érték 6 K-atomra: 8,24%). 50 Oldószertartalom: 5,1 %. Ultraibolya spektrum: (0,15 mólos vizes nátriumklorid-oldat és 0,1 n vizes nátriumhidroxidoldat elegyében; klorid-ion koncentráció 0,003 n): 1% 55 Inflexió kb. 237 millimikronnál Ej^ = Maximum 311 millimikronnál E 1( ^ Cirkuláris dichroizmus: a) 0,15 mólos vizes nátriumklorid-oldatban: 60 ,1% = 89 = 75 AE: 1 cm X103 320 millimikronnál = — 4,5 306 millimikronnál = — 4,9 21T millimikronnál = — 211 208 millimikronnál = — 314 65 195 millimikronnál = + 361 b) 0,15 mólos vizes nátriumklorid-oldat és 0,1 n vizes nátriumhidroxid-oldat elegyében (kloridion koncentráció: 0,003 n): ,1% AE' 1 cm X103 320 millimikronnál = — 4,6 222 millimikronnál = — 179 208 millimikronnál = — 294 195 millimikronnál = + 681 A görbén kb. 222 millimikronnál megjelenő negatív maximum igazolja, hogy a termék az inzulinhoz hasonlóan részben helikoidális szerkezetű. Papírkromatográfia: Oldószer: a) 4:1:5 arányú n-butanol — ecetsav — víz elegy. A papírt az alsó fázissal impregnáljuk, a futtatást a felső fázissal végezzük, b) 1:1 arányú szék. butanol — 10%-os vizes ecetsav-oldat elegy. Előhívószerként brómfenolkéket alkalmazunk. Mindkét esetben egyetlen folt jelenik meg a kromatogramon, amelynek R^. értéke azonos az inzulinéval. Tudomásunk szerint e vegyületet a szakirodalomban még nem ismertették. 7. példa (IB) általános képletű vegyület káliumsójának előállítása (Z és R metil-csoportot jelent, X és Y együtt trimetilén-csoportot képez). A termék vízben oldódik, és disszociált, vagy gyengén aszszociált állapotban van jelen. A. lépés: (V) általános képletű vegyület előállítása (Z és R metil-csoportot jelent, X és Y együtt trimetilén-csoportot képez). A termék többé-kevésbé erősen asszociált molekula-aggregátumokat képez. 16 ml 7%-os vizes káliumhidrogénkarbonátoldat és 2 ml 95%-os etanol elegyében (pH = 6,1) 2 g ciklohexán-l,3-diont oldunk, és az oldathoz keverés közben 0,2 g, a 4. példában előállított hidroklorid-sót adunk. Az elegyet közömbös gáz atmoszférában 25 C°-on 5 napig keverjük, majd a szuszpenziót 5 percig centrifugáljuk. A centrifugálás maradékát vízzel, acetonnal, majd éterrel mossuk, nitrogénáramban szárítjuk, végül vákuumban szárítjuk. 177 mg (84%) (V) általános képletű vegyületet kapunk, ahol R és Z metil-csoportot jelent, X és Y együtt trimetiléncsoportot képez. A termék többé-kevésbé erősen asszociált molekula-aggregátumokat képez. Cirkuláris dichroizmus (0,15 mólos vizes nátriumklorid-oldat és 0,1 n nátriumhidroxid-oldat elegyében, klorid-ion koncentráció 0,003 n): AEL,01 * 1 X103 292 millimikronnál = ^1% 3,8 215 millimikronnál = — 216 209 millimikronnál = — 383 B. lépés: (IB.) általános képletű vegyület káliumsójának előállítása (Z és R metil-csoportot jelent, X és Y együtt trimetilén-csoportot képez). A termék vízben oldódik, és disszociált, vagy gyengén aszszoeiált állapotban van jelen. Fenol, víz és 1 n, vizes káliunahidroxid-oldat 74:2:0:5; arányú elegyében (össztérjogat: 9,3 ml, pH = 8), közömbös gáz atmoszférában 140 mg, a 7. példa A. lépésében kapott terméket oldunk. 12.
