161171. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ribonukleozid- 2' : 3' -ciklofoszfát nátriumsók előállítására
161171 juk. Az oldatot tisztára szűrés után 5000 ml acetonra öntjük, majd a kivált csapadékot — mely a termék nátriumsója — nuccson szűrjük. A nuccspogácsát 2500 ml acetonban szuszpendálva 20 percet visszafolyatás közben forraljuk, ismét nuccson szűrünk, a csapadékot 100 ml acetonnal, majd ugyanannyi éterrel mossuk és vákuumexszikkátorban foszforpentoxid felett megszárítjuk. 28 g (72,4%) kromatográfiásan tiszta (Szilikagél HF254 rétegen 1,0 mólos ammónium-acetát: etanol=3:7 és izopropanol:cc. NH40H:víz= 7:0,1: 2,9 futtatóelegyben) adenozin-2':3'-ciklofoszfát nátriumsót nyerünk. 2. példa. Uridin-2' :3'-ciklofoszfát nátriumsó. Az 1. példához hasonlóan 32,4 g (0,1 mól) uridin-2'(3')-monofoszfátból kiindulva 200 ml metilalkohol és 450 ml aceton elegyében 70 ml (0,5 mól) trietilamin jelenlétében 20 ml (0,2 mól) klórhangyasav-etilészterrel végrehajtjuk a reakciót. A termék trietilamin sója a reakcióelegyben feloldódik, így a reakció végén homogén oldatot nyerünk, melyről az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A bepárlási maradékból metilalkoholos oldás után az 1. példában leírt módon izoláljuk az uridin-2':3'-ciklofoszfát nátrium sóját. Kitermelés: 23 g (63,3%) kromatográfiásan egységes anyag. 3. példa. Citidin-2':3'-ciklofoszfát nátriumsó. Az 1. példához hasonlóan 750 ml 2:1 arányú acetonmetanol elegyben, amely 105 ml trietilamint (0,75 mól) tartalmaz, 43 ml (0,3 mól) 100 ml vízmentes tetrahidrofuránban oldott klórhangyasav-benzilészterrel 0,1 mól citidin-2'(3')-monofoszfátból kiindulva hajtjuk végre a ciklizációt. A 2. példa szerinti feldolgozás után 27,5 g (78,5%) kromatográfiásan tiszta citidin-2':3-ciklofoszfát nátriumsót kapunk. 4. példa. Guanozin-2':3'-ciklofoszfát nátriumsó. 56,4 g (0,1 mól) bisz-trietilamménium-guanozin-2'(3')-monofoszfát 200 ml metilalkoholos oldatához 112 ml (0,8 mól) trietilamint, majd 400 ml acetonitrilt adunk és az 1. példa szerint 100 ml tetrahidrofuránban oldott 70 ml (0,5 mól) klórhangyasav-benzilészterrel a ciklizációt elvégezzük. A 2. példa szerint elvégezve a feldolgozást 24,5 g (60,6%) kromatográfiásan tiszta guanozin-2' :3'-ciklofoszfát nátriumsót nyerünk. Az előállított anyagok spektrális jellemzői: Adenozin-2' :3'-ciklofoszfát nátriumsó: pH 2 pH 11 ""max 257 nm 259 nm ^min 227 nm 225 nm Mólsúly max 379 386 250 E 260 0,87 0,80 „ 280 E 260 0,23 0,15 Citidin-2' :3'-ciklofoszfát nátriumsó: pH 2 pH 11 10 15 20 25 30 276—277 nm 240 nm 269 nm 252 nm 50 55 60 65 Mólsúlymax pH 2 374 pH 11 388 T, 250 E 260 0,47 0,85 T, 280 E 260 1,71 0,68 Guanozin-2' :3'-ciklofoszfát nátriumsó: 1 "•max pH 256—258 1 pH 7 nm 253 nm pH 11 258—259 nm 1 A min 228 nm 222—223 nm 231 nm Mólsúlymax 294 400 400 •-, 250 E 260 0,90 1,14 0,87 260 0,68 0,69 0,61 Uridin-2' :3'-ciklof oszf át-nátriumsó: '''max pH 2 261 nm pH 11 259—260 nm "•min 228—230 nm 240—243 nm Mólsúly max 250 260 371 0,82 390 0,88 „ 280 E 260 0,26 0,23 Ellenpélda: Az eredeti Michelson eljárás reprodukciója 10 mmólos mennyiségben a következő eredményt adja: 35 3,23 g citidin-2'(3')-monofoszfát 30 ml desztillált víz és 7,2 ml tri-n-butilamin elegyében készült oldatához 1,9 ml klórhangyasav-etilésztert adunk. A szakirodalomban közölt 5—10 perces keverés után a reakcióelegy rátegkromatográfiás 40 vizsgálat tanúsága szerint mintegy 50%-ban tartalmaz kiindulási anyagot. Ha a klórhangyasavetilésztert 30 perc alatt keverés közben folyamatosan adagoljuk, kb. 60%-os konverzió tapasztalható. A reakcióidő meghosszabbítása egyik eset-45 ben sem jár a konverzió javulásával. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás a (III) általános képletű ribonukleozid-2':3'-ciklofoszfát — ahol B adenin-, citozin-, guanin- vagy uracil-csoport — nátriumsójának előállítására a megfelelő (I) általános képletű ribonukleozid-2'(3')-monofoszfátokból — ahol B szubsztituens jelentése a fenti — kiindulva klórhangyasav-észterrel történő ciklizálás útján, azzal jellemezve, hogy az (I) általános képletű ribonukleozid-2'(3')-monofoszfát trialkilaminsóját — ahol B szubsztituens jelentése a fenti — 5—10 mól ekvivalens mennyiségű trialkilamin, előnyösen trietilamin jelenlétében 2—4 mólekvivalens mennyiségű klórhangyasav-alkilvagy -aralkilészterrel vízzel elegyedő poláros szerves oldószeres közegben eiklizáljuk, a ciklizálási reakció közben a klórhangyasav-észtert 3
