160860. lajstromszámú szabadalom • Reagens vércukor meghatározásához
ifsösöti 6 A találmány szerinti reagens az 1. táblázat utolsó oszlopából látható "nagyfokú érzékenysége a gyakorlatban ,nagyjelentőségű, mivel így lehetővé válik, hogy hipoklükéniiás esetekben, valamint olyan esetekben is, amelyeknél ma- 5 gyón kevés vér áll rendelkezésre, tehát 30—150 mg% véreukor-értékeknél 578 nm-nél mérve a vaikpróbáihoz viszonyítva 0,050—'0,082 nagyságrendű extinkciókat kapjunk, így a meghatározási hibák fotométeren való leolvasásnál nagyon 10 lecsökkennek. Egy további előnye a találmány szerinti reagensnek abban van, hogy ez a különösen előnyös összetétel tartományában egy úgynevezett 15 „optimális összetételt" képvisel. Ez azt jelenti, hogy a keverék minden egyes alkatrésze olyan koncentrációban van jelen, amelynél az érzékenység, a próba inkubációs ideje és a keletkező szín tartóssága a legnagyobb és a feltété- 20 lek csekély változása nem okoz lényeges különbségeket a kísérlet lefolyásánál vagy a mérési folyamatnál. A rendszerbeli hiba tehát ennél az összetételnél a Mietőségeklhez mérten csekély. 25 Az o-toluidinreakciónál keletkező szín alapjában véve bizonytalan. Feltehetően egy ismeretlen szekunder reakció lép fel, amely által az extinkció a 640 nm-es maximumnál és 578 nm 30 mérési hullámhossznál az idő során lecsökken. A színnek ez a bizonytalansága a találmány szerinti reagensnél megszűnik. A rajz 2. ábrája azt a megmaradó színerősséget mutatja az eredeti érték %-ába,n az idő függvényében felvive, 35 amelyet a próba szobahőmérsékleten az inkubáció befejezése után mutatott, összehasonlító anyagként a glikolsav-ireagenst használtuk. Az ábra alapján világosan látjuk a találmány szerinti reagens fölényét. Ez a javulás akkor jelent előnyt, ha egymás után nagy kísérletsorozatokat, végzünk. Egy további előnye a találmány szerinti reagensnek abban áll, hogy az állandósága fügr getlen a próbák glüfcózkoncentrációjától, Ezáltal a módszerbeli . hibalehetőségek, a legkisebbele lesznek. A találmány szerinti reagens egy további előnye olcsóságában van. A ftálsav ára a glikolsav árának csak kilenced részét teszi ki. A következő példák a találmány közelebbi megvilágítására szolgálnak. 1, példa: -.." ; ,\ 0,2 g tiakaríbamidot és 45,0 g ftálsavat feloldunk 100 ml, 152—1.55 °C fonrásjpontú dimetilformamidban. A kapott oldathoz 50 ml etilénglikol-monoetilétert adunk, majd végül 18,0 ml o-toluidint keverünk hozzá. A fehérje eltávolítására 0,1 ml vért 1,0 ml 3%-os triklórecetsaívba pipettázunk, összekeverjük és néhány perc állás után centrifugáljuk. A felülúszóból kiveszünk 0,2 ml-t és a fent leírt találmány szerinti reagens 2,0 ml-ével ösz-Ezekeverjük. Ezt a keveréket 8 percig forró vízfürdőn hevítjük, hideg vízben történő lehűtés után a keletkező zöld színt vakpróbával (triklórecetsav és reagens) összehasonlítva 578 nmnél fotométerben mérjük. Egy glükóz-standardot (100 mg glükóz/100 ml 0,.2%-os benzoesavoldat) hasonló módon kezelünk. A vércukortartalom kiszámítása az alábbi képlet szerint történik: a próba glükóztartalma i(img%) = £-°.-£U— X 100 ^standard A meghatározást különböző glükóztartalmú 45 reagenssel elérhető pontosság a következő kivénpróbák sorozatával megismételtük. Az eredmények a rajz 1. ábráján vannak feltüntetve. Ezek azon eredmények kitűnő arányosságát mutatják, amelyeket a találmány szerinti reagenssel kapunk. A fent leírt módon állapítottuk meg a megbatározott véreukor-értékek standard-eltérését egymástól ugyanabban a szérumban való 10-szeri meghatározás útján. A standard-eltérés, amely az egyes értékek számtani közép körüli szórásának megítélésére szolgál, a következő képlettel számítható: •V —N —1 A jelen esetben s= ±l,25mg%. A számtani A jelen esetben e = ±1,25 mg%. A számtani 50 55 60 fejezessél is leírható: X ± 1 s = 163,3 = 1,25 mg%. A variációs koefficiens (VK), amely a standard eltérés kifejezése a középérték %-ában, ±0,76% és a sXlOO VK = X képlet szerint számítható. 2. példa: Az o-toluidin-módszert a találmány szerinti reagens alkalmazása mellett az ismert enzimes, nagyon specifikus vércukor meghatározó-jnód-163,3 mgP/o-ot találtunk. A találmány szerinti «5 szerrel hexokináz/közbeeső fermenfcum rendszer 3
