160853. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a kallikrein-tripszin-inhibitor acil-származékaiból képezett karbamid-származékok előállítására

3 160853 4 A találmány szerinti új vegyületek egy további előnyé még abban van, hogy az enzimmel való komplex-képzés pl. tripszinnel, gyorsabban következik be, mint magával a kallikrem-tripsziin-iinlhibitorral és ezáltal a tripszin-giátló hatás hamarabb érvényesül. A találmány szerinti új vegyületeket úgy állítjuk elő, hogy a kallikrein-tripszin-inhibitor előbbiekben említett acil-szánmazékait cianát-szárirnazékokkal, ill. O-alkih^okatfbainid-származókokfcal, előnyöseibfoen O^metilizokarbamiddal ismert módon reagáltatjuk. A kallikrein-tripszin-inhibitor acüszármazékainak reaktív centrumában az első esetben lizin helyett homoci'trullint, a második esetben lizin helyett homoarginint kapunk, tehát pl. tetra(maleoil)-[15-homoiarginin]-kaUikréin-tripszm-áinhi]bito!rt, vagy tetra(maleoil)-[ IS^homocitrullin] -kallikrein-tripszin- inhibitort. A találmány szarinti új vegyületek a gyógyászatban ugyanazon esetekben, kerülnek felhasználásra, mint amilyenekben a kalliikrein-tripszin-inhibitort már, évek óta eredményesen alkalmazzák. A felhasználás formái és az alkalmazott dózisok megfelelnek azoknak, melyek már a kallikrein-tripszin-inhilhitarnál ismertek. 2. példa: 5 ml deszt. vízben 1,5 ml N-etMmorfolinból (jégecettel pH 8,0-ra beállítva) és 500 mg 5 káliumeianátból előállított 0,75 mlreakcióelegyet 10 mg tetra(maleoil)-ikalli!krein-tripszin-inhibitorral 56 óra hosszat 20 °C-on inkiubálunk. A reakcióelegyet, melyet 0,01 molos trisz-puffenrel pH 7,0^ra beállítottunk, Sephadex G—50 10 oszlopra öntjük. Az eluátum első frakcióját, melynek magasabb fdhérjetartálnlát az abszorpciós maximum mutatja, forgó vákuumbepárlóban a kiindulási térfogat 1/1,0 részére betöményítjük. A tetra(m,aleoü)-'[15-homocitrulkn]-kal-15 likrein-trjpszin-inhi'bitort tartalmazó oldat koncentrációját 275 nm hulüiámlhosíS'zon mért abszorpciós maximummal határoztuk. meg, melyet 0,1 mólos Trisz-pufferben oldott, ismert koncentrációjú tetra(maleoü)-kallikreiin-tripszin-in-20 hibitor (pH 7,0) oldatához viszonyítunk. Termelés: a tetra(maleoil)-{15-ho:moeitrullin]-kallekrein-tripszin-inhilbitor koncentrációja 0,67 mg/ml, összesen 5,33 mg, vagyis a bemért 25 tetra(nialieoil)-kallekrein-triipsziin-:inhibitor mennyiségére vonatkoztatott termelés 53%-os, fajlagos aktivitás 1,5—2,0 IE/mg. 1. példa.: 19 mg tetra(nTialeoil)-kalhkrein-triipszin-iinhibitort 4 ml 1,0 mól O-mietilizokarbamidban oldva 0,02 mól etiléndiamintetraecetsaivval 9,5 pH-n 60 óra hosszat szolbahőmérsékleten állni hagyunk, majd 4 ml 0,5 mólos ammóniumkloridoldat hozzáadásával pH 7,6-^ra állítjuk be és ezután az elegyet további 14 óra hosszat szobahőmérsékleten inkubáljuk. A reakcióelegyet 0,02 mólos amráóniumaeetátnpufifer oldattal pH 6-ra állítjuk be, majd Sephadex G—50 oszlopra öntve ugyanezzel a puff érrel eluiáljiuk. A tetra(malBoiä)-{15^homoarginin]-kallikirein-tripszin_ -inhibitort tartalmazó frakciót forgó vákuumbepárióban betöményítjük és Bio-gel-P-20 oszlopon sómentesítjük. A módosított kallikrein-tripszin-inhibitor sómentes oldatát liofilizáljuk. Termelés: liofilizálás után a sómentes oldat 63%-os termeléssel 13 mg tetrai(maleail)-i[15^homoarginin]-kiallikirem-tripszin-inlhibitort eredményez, melynek fajlagos aktivitása 3—3,6 IE;' /mg. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás a kallikrein-tripszin-inihibitornak a 26, 41 és 46 helyzetben levő lizin-rész í-amino-35 -csoportjain, valamint a kalliikrein-Jtripszin-inhibitarnak az arginin-rész N-véghelyzetű aminő-csoportjain karboxil- és/vagy szulfo-csoportokat tartalmazó acil-származékaiból képezett karbamid-száirimazékok előállítására, azzal jelle-40 mezve, hogy a kallikrein-tripszin-inihibitor aeil-számiazékait az asmmo-csoporttal reagálni képes danátokkal, pl. fémcianátolkkal, vagy O-nietilizokarbamiddal reagáltatjuk. 45 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás továbbfejlesztése gyógyszerkészítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy a toallikrein-tiripszin-inhibitor acü-származékaiból képezett karbamid-származékokat a szokásos gyógyászati hordozó 50 és adalékanyagokkal keverve gyógyászati alakokban visszük át. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. 7307780., Zrínyi (T) Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21—23.