160823. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a negamicin antibiotikum előállítására
160823 13 14 re (3520 /*g/ml) betöniényítjük. A tömény oldatot Dowex 1X2 (OH-forma) gyantán engedjük át, az oszlopot 350 ml vízzel mossuk, majd a negamicint 0,5 n HCl-al eluáljuk. Az aktív eluátumot (180 ml) 3 n ammóniával semlegesítjük. Szárítás után a nyers negamicint (5,5 g, tisztaság 294 /íg/ml) mint sárgás-barna port kapjuk. A teljes termelés 23,4%. 7. példa A 6. példa szerint kapott 3,4 g 29,4% tisztaságú port 22 ml vízben oldjuk és a pH-t 8,8-ra állítjuk be. Ezt az oldatot 250 ml Amberlite CG—50 (NH4-íorma) gyantát tartalmazó oszlopra öntjük (átmérő 26 mm), majd 500 ml vízzel való mosás után 0,1% NH4 OH oldatot engedünk át az oszlopon. Az eluátumot 20 milliliterenként frakcionáljuk. A negamicint a 69—81 frakciókban találjuk. A 69—73 frakciókból a 233 mg negamicint (90%-os) mint halvány sárga port kapjuk. A 74—77 frakcióból 383 mg tiszta negamicint és a 78—81 frakcióból 395 mg tiszta negamicint kapunk. A találmány tárgykörébe tartoznak továbbá a negamicin szerves és szervetlen savakkal képezett addíciós sói is. Ilyen savak pl. a sósav, hidrogénbroimid, kénsav, foszforsav, salétromsav, citromsav, maleinsav, almasav, borkősav, benzoesav, fahéj sav, aszkorbinsav, ecetsav, pikrinsav, p-hidroxiazobenzol-p'-szulfonsav, fitinsav, l-pimaroil-6,8a-cisz-endoboröstyánkősav, szulfaminsav, glikolsav és mandulasav. Gyógyászati célra a nem toxikus savak sói alkalmazhatók, de a toxikus savak, mint pl. a p-hidroxiazobanzol-p'-szulfonsav is felhasználható mint kicsapószer, a termék vizes oldatból való elkülönítésére. Fertőtlenítő szerként való felhasználásnál ez a toxicitás nem lényeges. A találmány szerint a negamicin, amennyiben szükséges, speciális célra gyógyszerként összeférhető, más vegyületekkel vagy gyószerekkel is "keverhető, mint amilyenek az antihisztaminok, szulfa-gyógyszerek (pl. szulfadiazin- szulfabenzarnid, szulfacetamid, szulfamilamid, szulfapiridin, szulfatiazol, szulfapirazin, szulfaguanidin, szulfaftálidin, szulfaszuxidin, szulfizoxazol, szulfanilon, fitalilszulfacetamid, N-3,4-<3imetilbenzoüszulfanilamid, benzilszulfanilamid és N'-2-(2-kinoxalil)-szulfanilamid), lipotrop-szerek (különösen a metionin, kolin, inozitol, és béta-szitoszterol és ezek keverékei), központi idegrendszert serkentő szerek (pl. aszpirin, szalicilamid, nátriumgentizát, p-acetilaminofenol, fenacetin, kodein), 5 hashajtók (pl. fenolftalein), nyugtatók (pl. barbiturátok, bromidok), penicillin-sók (pl. kálium-penicillin G, prokain, penicillin G, 1-efénamin-penicillin G, dibenzilamin-penioillin G; ezek kombinációi különösen hasznosak a vérszint kívánt 10 beállítására), fenoximetil-penicillin és sói, vagy más antibiotikumok (pl. sztreptomicin, dihidrosztreptomicin, kanamicin, bacitracin, polimixin, tirotricin, eritromicin, klórtetraciklin, oxitetraciklin, tetraciklin, oleandomicin, klóramfe-15 nikol, maginamicin, novobiocin, cikloszerin, neo» micin; néhány esetben mint széles sávú kombinációk vagy színergetikus hatást mutató vagy azonos hatású toxicitást csökkentő szerek), vitaminok (pl. A, At, Bu B 2 , Br„ B 12 -vitaminok és 20 ezen csoport tagjai, fólsav és ezen csoport tagjai, C, D2 , D3 és E-vitaminok), hormonok (pl. kortizon, hidrokortizon, 9-alfa-fluorkortizon, 9-alfa-fluor-hidrokortizon, prednizon és prednizolon), anyagcserét befolyásoló szerek (pl. 11,17-dihid-25 r oxi-9-alf a-fIuor-17-alfa-m.etil-4-androszten-3--on; 17-alfa-etil-19-jnortesztoszteron) és fungicid szerek (pl. miikosztatin). 30 Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás a negamicinnek nevezett új antibiotikum előállítására, mely antibiotikum gátolja a Pseudomonas, Salmonella, Shigella, Klebsiella, 85 E. coli, Staphylococcus stb. mikroorganizmusok fejlődését; mely vízben oldható, míg metanolban, etanolban, butanolban, észterekben, kloroformban, benzolban oldhatatlan; mely a 220— 350 m/i ultraibolya tartományban abszorpciós 40 maximummal nem rendelkezik; mely ninhidrid és Rydon-Smith reagenssel pozitív reakciót ad; mely amfoter tulajdonságú; mely három pK értéket: 3.55; 8.10; 9.75 mutat; mely sav-addíciós sókat képez, beleértve a hidroklorid, szulfát, p-45 -hidroxiazobenzol-p'-szulfonát sókat; mely metilésztert képez; mely optikailag aktív [Ö]29 D = +2,5° (c2, H2 0); mely az infravörös tartományban 'káliumbromiddal mérve abszorpciós sávokkal rendelkezik és a következő cm-1 hullámszá-50 mokat mutatja: 3430, 3200, 3050, 2950, 1660, 1590, 1405, 1320, 1140, 1050, 970, 890, 820, 720; melynek összegképlete C9H50N4O4 és szerkezeti képlete: CH2 —CH—CH 2 —CH—CH 2 —C— NH—N—CH2 — COOH NH2 OH NHo azzal jellemezve, hogy a Streptomyces purpeofuscus törzset (ATCC 21 470) szénhidrátot és nitrogén-tápanyagot tartalmazó vizes oldatban aerob körülmények közt tenyésztjük, majd a negamicint ebből az oldatból elkülönítjük. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a negamicin O CH3 antibiotikumot a vizes oldatból kationcserélő 60 gyantán végzett adszorpcióval, majd az ezt követő elucióval különítjük el. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy a negamicin 65 antibiotikumot a vizes oldatból aktív szénen 7
