160622. lajstromszámú szabadalom • Eljárás L-aszparagináz stabilizálására

1 160622 8 1 mg/ml legyen. 6,0—6,0 ml ilyen oldathoz 0,5 ml vizet, ill. 0,5 ml, rendre 50, 100, 200 mg polietilénglikolt tartalmazó vizes oldatot adunk. Az oldatokat 80 percen át 55 °C hőmérsékleten tartjuk. Az eredményeket a II. táblázat tartalmazza. 9. példa: 100 egység/mg aktivitású L-aszparagináz preparátumot 0,1 normál triszpufferben (pH = 8,0) feloldunk úgy, hogy a koncentráció 1 mg/ml legyen. 6,0—6,0 ml ilyen oldathoz hozzáadunk: a) 0,3 ml vizet, b) 0,2 ml vizet és 0,1 ml polietilénglikolt 50%-os vizes oldat), c) 0,2 ml glicinoldatot (100 mg/ml), d) 0,1 ml polietilénglikolt (50%-os vizes oldat) és 0,2 ml glicinoldatot (100 mg/ml). Az oldatot 80 percig 60 °C hőmérsékleten melegítjük, majd meghatározzuk L-aszparagináz tartalmukat; az eredményeket a III. táblázat tartalmazza. A fenti példákban az aktivitás-meghatározást a Cancer Research 26, 2213—17 (1968) irodalmi helyen ismertetett módszerrel végeztük. Az L-aszparagináz enzimet E. coli ATCC 9637 sejtekből nyertük ki a 726 113 sz. belga szabadalmi leírásban ismertetett módon. I. táblázat L-aszparagináz hőkezelése polietilénglikol jelenlétében A hőHőL-aszparagináz aktivitás kezelés mér(egység/mg) időtartama (perc), séklet (°C) adalék nélkül polietilénglikollal 0 55 86 104 20 55 74 103 40 55 62 101 60 55 61 94 80 55 43 94 0 60 91 96 20 60 49 69 40 60 33 48 60 60 26 40 80 60 16 32 II. táblázat Az L-aszparagináz stabilitásának függése a polietilénglikol mennyiségétől 10 16 20 25 30 35 40 45 50 Polietilénglikol koncentráció <mg/ml) 60 100 egység/mg aktivitású L-aszparagináz, 0,1 normál triszpuff erben (pH ==8,0) oldva; koncentráció 0,92 mg/ml. A polietilénglikol adalék koncentrációja 15,1 mg/ml. 65 A polietilénglikol enzimhez viszonyított aránya (mg/ml) Aktivitás melegítés előtt (egység/ml) Aktivitás 80 perc 55 °C-os melegítés után (egység/ /ml) Aktivitás az induló érték %-ában 0 7,5 15,0 30,0 0 8,2 16,3 32,6 92 98 98 98 43 86 94 91 47 88 96 93 Az L-aszparagináz preparátum specifikus aktivitása 100 egység/mg száraz súly. Az oldat koncentrációja 0,92 mg/ml. A polietilénglikol adalék az aktivitás 92 egység/ml-ről 98 egység/ /ml-re való (106%) emelkedését okozta. III. táblázat Az L-aszparagináz stabilitása több stabilizálószer jelenlétében Az L-aszparagináz aktivitása 80 percig 60 °C-on történő melegítés után az induló egység/ml érték %-ában L-aszparagináz önmagában 14 15 L-aszparagináz polietilénglikollal 44 48 L-aszparagináz glicinnel 52 57 L-aszparagináz poli-etilénglikollal és glicinnel 83 90 Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás L-aszparagináz stabilizálására, azzal jellemezve, hogy az Lnaszparagináz oldatához aminosavalkat, előnyösen glikokollt és/vagy polietilénglikolt adunk. (Elsőbbsége: 1969. február 12.) 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy csak aminosavakat, ill. glikokollt adagolunk, adalékként (Elsőbbsége: 1968. május 29.) 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás foganaíosítási módja, azzal jellemezve, hogy az aminosavat 0-,01—5,00%/g/ml mennyiségben adagoljuk. (Elsőbbsége: 1968. május 29.) 4