160416. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az YL 704 antibiotikumok előállítására

160416 17 18 7. példa: Az YL 704 A és YL 7,04 B antibiotikumok szétválasztás a öszlop-kromatográf iával A 4. példa szerinti eljárással kapott 108 g YL 704 antibiotikum-elegyet egy 2400 g koVasavat (a Mallinckrodt Chemical Works gyártmánya) tartalmazó, 120 am magas, 8 cm átmérőjű oszlopon kromatográfiás elválasztásnak vetjük siá, oldószerként benzol és aceton elegyét (15— 50 tf% acetontartalommal) alkalmazva; 500 ml-es frakciókat fogunk fel. Az 1—4. frakcióban az oldószer acetontartalma 15%, az 5—20. frakcióban 30%, a 21—24. frakcióban 40% és a 25—30. frakcióban 50%. Ily módon eljárva, az YL 704 A antibiotikum főként a 7—13. frakcióiban, az YL 704 B antibiotikum pedig főként a 15—27. frakcióban eluálódik. Az eluátum 7—111. frakcióját egyesítjük és bepároljuk. Ily módon 7,12 g YL 704 A antibiotikumot kapunk száraz por alakjában; 15—2i6. frakcióból ugyanilyen módon 17,(1 g YL 704 B antibiotikumot nyerünk ki, ugyancsak száraz por alakjában. 8. példa: Az YL 704 Ai és YL 704 A2

antibiotikumok szétválasztása és tisztítása A 7. példa szerinti módon kapott 3 g YL 704 A antibiotikumot oszlop-kromatográfiás szétválasztásnak vetjük alá, egy 300 g alumíniumoxidot tartalmazó, 50 cm magas, 5 cm átmérőjű oszlopon, oldószerként benzol és etilaoetát elegyét (száz térfogatban 10—40 tf. rész'etilacetát) alkalmazva; 20 ml-es frakciókat fogunk fel. Az 1—50. frakcióban az etilacetát-tartalom 10 tf., az 51—^200. frakcióban 20 tf., a 201-450. frakcióban 30 tf. és a további frakciókban 40 tf. Ily módon eljárva, az YL 704 Ai antibiotikumot főként a 250-^410. frakcióban, az YL 704 A2 antibiotikumot pedig főiként a 480—600 frakcióban kapjuk. A 280—350. frakciót egyesítjük és bepároljuk és így 2,1 g YL 704 Ai antibiotikumot kapunk száraz por alakjában. Az 515—592. frakcióból ugyanezzel a módszerrel 380 mg YL 704 A2

antibiotikumot nyerünk ki. Az így kapott YL 704 Ai és YL 704 A2

antibiotikumokat külön-ikülön benzolból átkrisitályosítjuk; fehér tűkristályok alakjában kapjuk a két, antibiotikumot. 9. példa: Az YL 704 Bi és YL 704 B2

antibiotikumok szétválasztása és tisztítása1 A 7. példa szerinti eljárással kapott 4 g YL 704 B antibiotikumot oszlop-kromatográfiás szétválasztásnak vetjük alá, 400 g kovásavat (a Mallinckrodt Chemical Works gyártmánya) tar-10 16 20 25 30 35 40 45 50 55 60 "85 talmazó, 4 cm magas, 5 am átmérőjű oszlopon: oldószerként benzol és aceton elegyét (aeetontartalom 25—45 tf%) alkalmazva. 20 ml-es frakciókat fogunk fel. Az oldószer aoétontartalmát úgy állítjuk be, hogy az 1—120. frakció 25%, a 121—280. frakció 30% és a 281—395. frakció 45%, acetont tartalmazzon. A fenti módon eljárva az YL 704 Bi antibiotikum főként a 115— 280. frakcióban, az YL 704 B2 antibiotikum pedig főként a 311—385. frakcióban jelenik meg. A 1.20'—2i80. frakciót egyesítjük és az oldószert elpároloigtatguk, ily módon 1,2 g YL 704 Bi antibiotikumot kapunk száraz por alakjában; a 320—875. frakcióból ugyanilyen módon 430 mg YL 704 B2

antibiotikumot nyerünk ki. Az YL 704 Bi és YL 704 B2

antibiotikumot külön-külön kristályosítjuk át benzol és.n-hexán eliegyéből; mindkét antibiotikumot fehér tűkristályok alakjában kapjuk. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás az YL 704 antibiotikumok előállítására, azzal jellemezve, hogy a Streptomyces platensis mikroorganizmus YL 704 antibiotikumot termelő törzsét valamely szénforrást, nitrogénforrást és szervetlen sókat tartalmazó vizes tápközegben aerob körülmények között szaporítjuk és a fermentációs közegben felgyülemlett YL 704 antibiotikumot elkülönítjük, majd kívánt esetben a kivont antibiotikumot ellenáramú «megosztásnak vagy oszlop-kromatográfiás szétválasztásnak vetjük alá és az YL 704 A és YL 704 B antibiotikumot ezáltal szétválasztjuk egymástól és kívánt esetben a szétválasztott YL 704 A és/vagy YL 704 B antibiotikumot oszlop-kramatokráfiával YL 704 At, YL 704 A2 és/vagy YL 704 B

1;

YL 704 B

2

antibiotikumra választjuk szét. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a mikroorganizmust alámerülő aerob kultúrában tenyésztjük. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganat 0-sítási módja, azzal jellemezve, hogy a fermentációt 25—35 °C hőmérsékleten folytatjuk le. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganaltositási módja, azzal jellemezve, hogy a fermentációt 48—i60 óra hosszat folytatjuk. 5. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a fermentációt alámerülő aerob kultúrában, 215—36 °C hőmérsékleten, 48-^60 óra hosszat folytatjuk. 6. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganat 0-sítási módja, azzal jellemezve, hogy az antibiotikumot a fermentléből 6,5—9,0 pH-értéken valamely vízzel nem elegyedő oldószerrel történő extrakció útján különítjük el, majd az antibiotikumot a kivonatból kinyerjük. 7. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az antibiotikumot a fermentléből a lé leszűrése, a szűr-9