160370. lajstromszámú szabadalom • Eljárás korrinvázas vegyületek fenolformaldehid gyantakomplexeinek előállítására
160370 8 A súly áll andóságig szárított és elporított korrinoid-tfenol-iformaldehid gyantakomiplexiből ±0,1 mg pontossággal lemérünk 0,ß0 g körüli mennyiségeit, és az oldószereleggyel mennyiségileg bemossuk 50 ml-es mérőlombiklba. (Oldószerelegy: 1 térfogatrész frissen desztillált, vízmentes fenol és 2 térifogatrész vízmentes kloroform elegye). A mérőlomibikot 10 percen át rázzuk, majd az oldószereleggyel jelig töltjük. 10 perc várakozási idő után — mely alatt a hordozóként jelenlevő diatoima-, ill. 'kovaföld leülepszik — az oldat tisztájából HAGEDORN—JANSEN-pipettával MACHEREY-^NAGEL No 214 szűrőpapírra vékony csíkban felviszünk 2X0,1 ml-t. A papír méretétől függően több anyagmintát is felvihetünk egy lapra. Standardként B12-vitamint viszünk fel. Rövid ideig tartó szárítás után a továbbiakban a British Pharmacopoeia 1988 „Coibalamin" c. cikkelyében (26:2. oldal) szereplő „Coloured impurities" cím alatt leírt papírkromatográfiás vizsgálati módszer szerint járunk el. A különféle korrinoidok mennyiségi kiértékelését előnyösen cianid tartalmú futtatóelegyben végezzük. Ezáltal ciano-korrinoidokat kapunk a futtatás folyamán. A krornatogramból kivágott és a csikóikról leoldott színezékek kiértékelését a gyógyszerkönyvi előírások szerint végezzük. 1. példa: Metanofoaktériumois fermentációból nyert 60 liter feltárt és fehérjementesítés után szűrt vizes oldathoz, melynek Bi2-vitamin tartalma 485 mg, 180 g kovaföldet adunk. Ezután 150 ml 40%-os fenol-formaldehid gyanta konoentrátumot, amelynek monomerre számított fenoltartalma 60 g, felhígítunk 3 liter csapvízzel, majd keverés közben, vékony sugárban a Bi2-vitamin tartalmú oldathoz öntjük. A lúgos oldat pH^értékét 10%,-os HCl oldattal 4,i2-re állítjuk és az elegyet kb. fél óráig tovább keverjük. Ezalatt a kivált csapadék a vizes oldat kobalamint ártalmát mennyiségileg megköti. A keverés befejezése után a rózsaszínű csapadékot kevés kovafölddel fedett porcelán szívószűrőin összegyűjtjük, kevés csapvízzel átmossuk, majd kiszedve, 60 °C-ot meg nem haladó hőmérsékleten légáramban megszárítjuk. A kapott megszárított csapadék súlya 240 g. 1 g-os mennyiségéből történő leoldás, majd papírkromatográfiás értékelés alapján meghatározzuk a B) a-vitamin tartalmát, mely összesen 461 mg. 2. példa: Metanohaktiérkumos fermentációból nyert 60 liter feldolgozási anyaMg vizes oldatához, amelynek Bi2-'VÍtamin tartalma 422,8 mg, 60 g kovaföldet adunk. Ezután ISO ml 40«% fenol-formaldehid gyanta konicentrátíuimot, melynek monomerre számított fenoltartalma 60 g, felhígítunk 3 liter csapvízzel, majd keverés közben vékony sugárban a B12 -vitamin tartalmú oldathoz öntjük. A lúgos oldat pH-értékét 10%-os HCl oldattal 4,2-re állítjuk és kJb. fél óráig tovább keverjük. Ezalatt a kivált csapadék a vizes oldat kobalarnin tartalmát mennyiségileg megköti. A keverés befejezése után ezt a rózsaszínű csapadékot kevés kovafölddel fedett porcelán szívószűrőn összegyűjtjük, majd kevés csapvízzel átmossuk. A rózsaszínű nedves csapadék súlya 163 g, melynek B(2-vitamin tartalma papírkromatográfiás mennyiségi meghatározás alapján 401 mg. 3. példa: Étkezésre alkalmas állatok felaprított májából készült 25 liter vizes kivonathoz, melyet hőkoiaguláltatás, szűrés és fehérjementesítés után nyerünk, 7Í5 g kovaiföldet adunk. Az oldat öszszes B-vitamin tartalma lí3,6 mg. Ezután 62,5 ml 40%-os fenol-iformaldehíid gyanta koncentrátuimot, amelynek monomerre számított fenoltartalma 26 g, felhígítunk 1,5 liter csapvízzel, majd keverés közben, vékony sugárban a vizes (májkivonathoz öntjük. A lúgos oldat pH-értékét 10%-os HCl oldattal 4,2-re állítjuk és kb. fél óráig tovább keverjük. Ezalatt a kivált csapadék a vizes oldat kobalarnin tartalmát menynyiségileg megköti. A csapadékos oldatot kevés kovafölddel fedett szívószűrőn átszűrjük. A lemért nedves csapadék súlya 170 g. Értékmérés alapján a gyanta komplex B-vitamin tartalma 13,0 mg, ami 95%-os termelésnek felel meg. 4. példa: Metanobáktériumos fermentációból származó 20 liter feltárt és fehérjementesítés után szűrt vizes oldathoz, melyet cianid jelenlétében végzett hőkezelés, majd vaskloridos kezelés után nyertünk, 60 g kovaföldet adunk. A kivonat papírkromatográfiás meghatározás alapján 176 mg Bi2-witamint és 40 mg B,2 ^vitamin faktor III-at tartalmaz. Ezután 50 ml 40%-os fenol-formaldehid gyanta koncentrátumot, amelynek monomerre szá-10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 A korrinoid-fenol^formaldehid gyantakomplexek azonosításánál úgy járunk el, hogy az előző törzsoldatból papírra felvitt, majd megszárított mintát vízzel telített sec.ibutanolos oldószerben futtatjuk cianidrnentesen. A standardként alkalmazott Bi2-^vitamin, hidroxo-, nitrito-, rodanato-, szulfito^koibalaminnal kapott egyező elmozdulás egyértelműen a kérdéses korrinoid azonosságát mutatja. A találmány szerinti eljárás kivitelezésének részleteit az alábbi példák szemléltetik. 4
