160199. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az SL 3440 antibiotikum előállítására
160199 r. Az új SL 3440 antibiotikum a következőképpen jellemezhető: \ színtelen, sűrű olaj, elemi összetétele: C 64,3, H 7,7, N 10,3% fajlagos forgatóképesség: (aI20 D = —!2;47,5° (c=0,3 benzolba) ultraibolya színkép (metanolban): lásd az 1. ábrát infravörös színkép (metilénkloridban): sávok többek közlött 1685 és 1635 cm_1 -nél (2. ábra). Az új antibiotikumnak értékes farmakolóíjia|i tulajdonságai vannak, és ezért gyógyszerként használható. Az új antibiotikum nagymértékben fungisztatikus hatású különféle gombafertőzésokozókkal szemben. Különösen említésre méltó a jó in vitro hatás a következő gombák ellen: Legkisebb gátló koncentráció Trichophyton mentagrophytes 10 y ml Histoplasma capsulatum ' 10 y/ml Trichophyton tonsurans 10 y/ml Trichophyton rubrum 10 y/ml Epidermophyton floccosum 10 y/ml Microsporum canis > ,- ,10 y/ml , Microsporum audouinii ' 10 y/ml Histoplasma duboisü 10 y/ml Blastomyces brasiliensis 10 y/ml Blastomyces dermatitidis 1 y/ml Sporotrichum schenkii 1.00 y/ml í Ezenkívül az új antibiotikumnak r kifejezett citosztatikus hatása va«, miként az bebizonyor • sult in vitro egy egértumörból származó sejttörzsön (P—aiSHmastocytom), valif/mint in vivo patkány Walker-tutnorán. Az "új antibiotikum 0,0004 y/ml koncentrációnál in vitro a sejtszaporodást. 50%-kal csökkenti; in vivo 30—120 mg/kg melegvérű testsúly adagokban kell; f !alkalmazni, amikor is az adag a kívánt hatástól és <n|z alkalmazás mwdjától függ.. Általában •nagy emlősállatokra 20—<100O mg-oS adagok bizonyultak előnyösnek, célszerűen hetenként kétszer beadva. Pérorális alkialmazásra szánt •készítmények 20-wl000 ing hatóanyagot tartalm.azní)|k folyékony vagy szilárd hordozóval keverve. -Helyileg 0,1—12% hatóanyagot tartalma- ' zó poroík, kenőcsök, tinkturák vagy permet al'kalmazfaifjtók^ A következő példában ismertetjük az eljárás végrehajtását anélkül, hogy a találmány terjedelmét erre kívánnánk korlátozni.: Minden hőmérsékleti adatot Celsius-jf okokban ?fdunk meg. "'• • > •' *': " -.". 10 15, 20 25 30 35 40 45 50 55 60 oerelóz tripton NaN03 K2 HP0 4 KCl -MgS04 -7H20 FeS04 -7H 2 0 g g 40 5 3 1 g 500 mg 500 mg 10 mg ionmentesítebt' vízzel kiegészítve 1 literre, beoltunk a Diheterospora ehlamydosporiFj NRRL 3472 törzs spóraszuszpenziójával, és levegőztetés (1.0 liter levegő'perc/liter táptalaj) és keverés (300 fordulat percenként) közben 8 napig 18°-on inkubálunk. A micéliumot elválasztjuk, és a fermentlevet etilénkloriddifil extraháljuk. A nyers kivonatot kovaaavgélen {Merck, 0,06— 0,2 mm) kormatografál'juk, és a hatóanyagot kloraform és metanol t9i9 :1 epányú elegyével eluáljuk. Áz oltásra használt spóraszuszpenzió az eredeti izolált törzsnek a következő összetételű agaros táptalajon 8 napig 27°-on VEJló inkubálásával készül: , oerelóz szálasagar malátakivon?<t élesztőkivonat pepton KH2PO4 MgS04 -7H 2 0 20 g 20 g 2 g 2 g 2 g 2 g 2 g ionmentesített vízzel kiegészítve 1 literre. h~ Szabadalmi igénypontok: ^ 1. Eljárás az SL 3440 új antibiotikum előállítására azzal jellemezve, hogy tef Diheterospora chlarnydosporia NRRL 3472 új gombai törzset táptalajon vagy,. táptalajban tenyészr tünk, majd az SL .3440 antibiotikumot a fermentléből és a mieéliuiftból elkülönítjük és megtisztítjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módjai .azzal jellemezve, hogy a tenyésztést a szénheterotóf mikroorganizmusok szokásos tápanyagait, szénforrásbént előnyösen glukózt,, keményítőt, dextrint, laktózt, szacharózt, nitrogéniforrásként szerves vagy szervetlen nitrogéntartalmú vegyületeket, előnyösen triptont, élesztő- VF.gy húskivonatot, ammómum'klorido't, ammóniumnitrátot, aminosavakat tartalmazó táptalajon vagy táptalajban ásványi sók-'és nyomelemek jelénlétében végezzük. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy az új NRRL 3472 törzsiét 3—18 népig tenyésztjük. Egy fermentorban 10 liter következő összetételű táptalajt 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy az új NRRL 3472 törzset 18 és 27 °C közötti hőmérsékleten 65 tenyésztjük. 2
