160060. lajstromszámú szabadalom • Eljárás penicillin előállítására
160060 8 adagolt 1—1 adag steril ammóniumszulfáttal a pH = 7,0 értéket mutatott. 85 órás kortól kezdődően 10 percenként program szerint adagoltunk steril napraforgóolajat; egy adag napraíorgóolaj súlya 0,7 kg volt. A program szerinti adagolással és a korábbi habzás esetén alkalmazott adagolással összesen 190 kg olajat adagoltunk be, és ezzel a fermentáció végéig a pH-t 7,0 értéken tartottuk. A fermentáció '22—35 órás korig 0,04%/óra, 35—-85 órás korig 0,055%/óra, 85—90 órás korig 0,068%'óra, 90—105 órás korig 0%/óra laktózfelhasználási sebességét mutatott. A fermentáció 22— 35 órás korig 95 NE/ml/óra, 35— 85 órás korig 135 NE/ml/óra, 85— 90 órás korig 120 NE/ml/óra, 90—105 órás korig 90 NE/ml/óra penicillin bioszintetizáló sebességet ért el. A fermentációt 105 órás korig folytattuk, 25 °C-on. A fermentáció csúcsaktivitása 105 órás korban 9980 NE/ml volt. A 105 órás fermentáció feldolgozását az 1. példával megegyező módszerrel végeztük el. A fermentációból 102,3 MldE V-penieillin K-sót nyertünk ki. 4. példa: Az előző példában alkalmazottal megegyező törzset 3 m3 -es keverqs vasfermentorban 1:0,7 arányú levegőztetés mellett, 25 °C-on, 2 % szacharózt, 1,8% 'kukoricalekvárt, 0,5% káleiumkarbonátot, 0,5% pálmaolajat tartalmazó 6,1-es pH-jú steril táptalajon 44 órán át inakulummá növesztettük, ekkor pH-ja 6,6 volt. Az inokulum fermentációt 30 m»-es keverős vasfermentorban elkészített 18 ms 1 % kukoricalekvárt, 2,4 % földimogyorólisztet, 0,1 % napraforgóolajat, 0,27% fenoxiecetsavat tartalmazó steril táptalajba oltottuk. A fermentációs táptalaj mennyiségéhez viszonyítottan az inokulum fermentlé mennyisége 10% volt. A fermentáció alatt átlagosan 1:0,7 arányú, megfelelő keveréssel 3,7 szulfitértéket jelentő levegőztetést biztosítottunk. Indításkor a fermentáció pH-ja 6,1 volt, ami fokozatosan emelkedett, majd 28 órás kortól a fermentáció végéig 0,07% nagyságú szacharóz adagok — 50%r os oldatban — folyamatos adagolásával, amihez 78 órás kortól hozzájárult a napraforgó olaj adagolás is, a pH-t 7,0 értéken tartottuk. 10 15 20 25 30 35 45 50 55 60 65 Ily módon összesen a fermentlé térfogatára számolva 5,6% szaharózt használtunk fel. A szaharóz koncentráció a fermentleben 24 órás korban közelítette meg (0,2%) és 78 órás korban haladta meg (0,29%) a katabolit represzsziós szintet. A fermentációhoz 18—-74 órás korig 2 óránként, 74—«80 órás korig 3 óránként, 80—88 órás korig 4 óránként, 88—98 órás korig 5 óránként, 98-ferm. végéig 6 óránként adagoltunk 1—1 adag steril ammóniumszulfát oldatot. Egy adag ammóniumszulfát 14 liter 40%K>s oldat volt. A fermentációihoz habzás esetén, majd 78 órás kortól, amikor annak cukor koncentráció ja meghaladta a 0,25% értéket, 10 percenként program szerint adagoltunk steril napraforgóolajat, ami 85 órás kortól kezdve lehetővé tette. hogy a pH-t továbbra is 7,0 értéken tartsuk anélkül, hogy a fermentleben mérhető cukorkoncentráció meghaladta volna a katabolit repressziós értéket. A fermentáció 22— 35 órás korig 35— 85 órás korig 85— 90 órás korig 90—105 órás korig 96 NE/ml/óra, 139 NE/ml/óra, 120 NE/ml/óra, 104 NE/ml/óra penicillin bioszintetizáló sebességet ért el. A fermentációt 105 órás korig folytattuk 25 °C-on. A fermentáció csúcsaktivitása 105 órás korban 10600 NE/ml volt. A 105 órás korú fermentáció feldolgozását az 1. példával megegyező módszerrel végeztük el. A fermentációból 109,6 MldE V-penicillin K-40 sót nyertünk ki. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás penicillin fermentációs előállítására komplex táptalajon a N:C arány és pH érték folyamatos optimális szinten tartásával N-forrásként fiziológiailag savanyú sók, célszerűen ammónszulfát, majd C-forrásként katabolit repressziót nem okozó olajok, célszerűen napraforgóolaj adagolásával azzal jellemezve, hogy a fiziológiailag savanyú sók majd sorrendben ezután a katabolit repressziót nem okozó olajok folyamatos adagolása beállításával a pH-t 7,0 értéken tartjuk és így a fermentáció C-forrásaként alkalmazott szaharóz, vagy laktóz katabolit repressziót okozó hatását kiküszöböljük. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítás! módja azzal jellemezve, hogy a fermentációban adagolás útján létrehozott szaharózkoncentráció 0,25% alatti, ill. laktóz alkalmazása esetén a felhasználás sebességének 0,06%' /óra szint alatti értéken való tartása mellett a 4
