159839. lajstromszámú szabadalom • Eljárás L-aszparagináz dúsítására

159839 15 16 tet lecentrifugázzuk, acetonnal mossuk és megszárítjuk. Kitermelés: kb. 33 g 200-235 egység/mg tisztaságú anyag. 22. példa A 21. példában leírtak szerint járunk el, de 200 ml metanolt adunk az oldathoz. 23. példa A 21. példában leírtak szerint járunk el, de 100 ml etanolt adunk az oldathoz. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás L-aszparagináz dúsítására, azzal jellemezve, hogy előnyösen a pirogénanyagok leválasztása után a nyers, vizes L-aszparagináz oldatot adott esetben karbamid vagy más, a hidrogénhíd kötéseket megbontó amidok hozzáadása után polialkilénglikollal elegyítjük és az így kapott, L-aszparaginázt tartalmazó csapadékot elválasztjuk és adott esetben tovább tisztítjuk. (Elsőbbsége: 1968. december 27.) 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a nyers, vizes L-aszparagináz oldatot polialkilénglikollal elegyítjük és az így kapott, L-aszparaginázt tartalmazó csapadékot elválasztjuk és adott esetben tovább tisztítjuk. (Elsőbbsége: 1967. december 27.) 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy olyan polietilénglikolt vagy pohpropilénglikolt alkalmazunk, amelynek molekulasúlya előnyösen legfeljebb 10.000, különösen előnyösen 1000 és 5000 közötti. (Elsőbbsége : 1967. december 27.) 4. Az 1—3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a kicsapó oldat pohalkilénglikol-koncentrációját 40 súly% és 60 súly% közöttire állítjuk be. (Elsőbbsége: 1967. december 27.) 5. Az 1—4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a kicsapást 4—10 pH-érték tartományban hajtjuk végre. (Elsőbbsége: 1967. december 27.) 6. Az 1—5. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a polialkilénglikollal kicsapott, L-aszparaginázt tartalmazó csapadékot vízben feloldjuk, az oldhatatlan kísérőanyagokat leválasztjuk, majd aceton vagy kis szénatomszámú alkoholok hozzáadásával ismét L-aszparagináz csapadékot állítunk elő. (Elsőbbsége: 1967. december 27.) 7. Az 1—5. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a polialkilénglikollal kicsapott, L-aszparagináz tartalmú csapadékot vízben feloldjuk, az oldhatatlan kísérőanyagokat leválasztjuk, az oldatban levő polialkilénglikolt az enzimet nem denaturáló és vízzel nem elegyedő oldószerrel extraháljuk vagy dialízissel eltávolítjuk, majd a vizes oldatból az L-aszparaginázt kifagyasztással kinyerjük. (Elsőbbsége: 1967. december 27.) 8. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzá jellemezve, hogy a polialkilénglikollal kicsapott, L-aszparagináz tartalmú csapadékot megszárítjuk és acetonnal vagy más oldó-5 szerrel extraháljuk. (Elsőbbsége: 1967. december 27.) 9. Az 1—8. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a nyers, vizes L-aszparagináz oldalhoz karbamidot vagy más, a hidrogénhid kötéseket megbontó amidokat 10 adunk hozzá, és ezt követően hajtjuk végre a pohalkilénglikolos kicsapást. (Elsőbbsége: 1968. április 6.) 10. A 9. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzá jellemezve, hogy más, a hidrogénhid kötéseket megbontó amidként guanidinhidrokloridot, 15 formamidot vagy acetamidot alkámazunk. (Elsőbbsége: 1968. április 6.) 11. Az 1-5. igénypontok és a 9. vagy 10. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzá jellemezve, hogy a polietilénglikolos 20 kicsapássá 100—150 egység/mg protein aktivitásúra dúsított enzimet az enzim izoelektromos pontján, előnyösen pH 4,9—5,5 értéktartományban vetjük áá kicsapásnak. (Elsőbbsége: 1968. április 6.) 25 12. A 11. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzá jellemezve, hogy a kicsapást kis mennyiségű polietilénglikollal segítjük elő. (Elsőbbsége: 1968. április 6.) 13. A 11. igénypont szerinti eljárás foganatosítási 3Q módja, azzá jellemezve, hogy a kicsapást vízzel elegyedő szerves oldószerrel segítjük elő. (Elsőbbsége: 1968. április 6.) 14. A 11.—13. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzá jellemezve, hogy 35 dúsított L-aszparagináz tömény oldatából végezzük el az enzim izoelektromos pontján a kicsapást, (Elsőbbsége: 1968. április 6.) 15. Az 1-14. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzá jellemezve, hogy a 40 pirogénanyagok leválasztása céljából az enzimet kis ionerősségű pufferoldatban feloldjuk és az így kapott oldatot vagy a) duzzasztott és ugyanabban a pufferoldatban egyensúlyi állapotba hozott dietilaminoetü-dextrángél 45 kromatografáó oszlopra felvisszük, majd az enzimet emelkedő sókoncentráció mellett frakcionáljuk és eluáljuk, vagy b) dietilaminoetil-dextrángéllel összekeverjük, a szuszpenziót leszűrjük vagy centrifugájuk, majd a gél 50 átá megkötött enzimet nagyobb sókoncentrációjú pufferoldattá eluájuk. (Elsőbbsége: 1968. május 6.) 16. A 15. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzá jellemezve, hogy a kromatografáandó, 55 nyers enzimpreparátumot kb. 0,02 mólos pufferoldatban, előnyösen ammóniumacetát- vagy formiát pufferoldatban, semleges vagy enyhén alkalikus, kb. 7—8,5 pH érték tartományban előnyösen 1-2% koncentrációban oldjuk fel. (Elsőbbsége: 1968. május 60 6.) 17. A 15. vagy 16. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzá jellemezve, hogy a kromatografáó oszlop átmérőjének arányát az ágymagassághoz viszonyítva 1:3 és 1:30 közöttinek választjuk meg 65 és az átfolyási sebességet 2—4 ml/óra/cm2

oszlopkeresztmetszet értéken tartjuk. (Elsőbbsége: 1968. május 6.) -8