159745. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 13béta-rövidszénláncú alkil-3-metoxi-17béta-hidroxi-8,14 szekogona-1,3,5(10),9(11)-tetraén-14-on vegyületek előállítására
159745 tart oltottunk. A táptalaj 2% kukoricalekvárt és 3% szacharózt tartalmazott. Az indulási sejtszám 1,8 x 106 sejt volt ml-enként. A tenyésztést 30 liter levegő át áramoltatása mellett 320 beverőfordulatszám/perc mellett végeztük, 24 5 C°-on. 20 órás korban a tenyészet 30 literével 30 liter friss táptalajt oltottunk. 6 óra múlva a kinőtt tenyészetet újra átoltottuk. A tenyészetet friss táptalajjal kétszeresre hígítottuk, és ezt a hígítást 6 óránként ismételtük. Az át oltás iu előtti sejtko-neentráció a harmadik átoltás után 108 -ra állt be. Sarjadzó sejteket a tenyészet nem tartalmazott, mert a növekedésre szánt 6 óra alatt a teljes fejlődési ciklus befejeződött. Ezután 6 óránként az anyakultúrából indukciós 15 tenyészeteket ágaztattunk le, ami táptalajöszszetételben megegyezett az anyaikultúrával, de indulásnál 12 g 3-metoxi-J8,14-szeko-l,3,5(10)-9(ll)^ösztratetraén-:14,l 17-dion.t adagoltunk (az indukciós térfogat 60 liter). 6 óra múlva ezt az 20 indukciós tenyészetet friss táptalajjal egészítettük ki (60 liter) és 120 g előbbi vegyületet, valamint 20 g ß-naftolt adagoltunk. A szubsztráturnnfogyást 4 óránként ellenőriztük, és a fermentlé 3-metoxi~8,il4-;Szöko^l,3,5i(10),9((ll)- 25 -ösztratetraénm4,17^dion tartalmát 0,1%-ra egészítettük ki minden esetben. Végül is 30 óra alatt 500 g szeko-vegyületet adagoltunk 60, 80, 60, 68, 50, 50 g-os részleteíkben.A 42. órában a mérhető szubsztrátikoncentráció 200 ftg ml alá ,50 csökkent. A teljes fermentációs folyadékot ekkor etilacetáttal extraháltuk, az extraktumot szárazra pároltuk, az olajos maradékot petroléterrel tisztítottuk, majd a 3-metoxi-8,14-szeko-l^.Slí'lOJ.aíllJ-öszbratetraén-n^-olJH-ont kris- :i5 tályosítottuk. 272 g kristályos terméket nyertünk; op.: 112—'113 C°. (Ű)D = —38,3 (c = 1. dioxán). E265 = 20700 (metanol). 7. példa: 40 Az élesztősejték tenyésztését a 2. példában leírt eljáráshoz hasonlóan végeztük. Sacoharomyces avarum (MNG 55) törzs ferdeagar tenyészetével vattadugóvial lezárt 10 db 500 ml- 45 es Erlenmayer lombikókba levő 100—,100 ml térfogatú 2% kukoricalékvárt, 3% szacharózt tartalmazó steril táptalajt oltottunk. Indulási sejtszám 2,5 x 108/ml. A sejtszaporítást 260 ford./perc sebességű rázóasztalon, 24 C° hő- 50 mérsékleten 20 órán keresztül végeztük. Az élesztősejteket szűrőyásznon szűrtük, majd 1/5 térfogatnyi csapvízzel mostuk. A kimosott •sejtéket az eredetivel azonos térfogatú 0,1 M pH 7 foszfátpuftferben szuszpendáltuk. A sejtszusz- 55 penzióhoz lombikonként 50—50 mg 3-metoxi-8,14-sizeko-l,3,5(10),a(ll)-ösztratetraén-14,17--diont és 0,5 g glükózt, öt lombikhoz pedig lombikonként 6 mg yj-naiftolt is adagoltunk. Az előbb leírt körülmények között 24 C°-on vég- 60 zett 20 órás inkubálás után a lombikok tartalmát diklóretánnal extraháltuk. Az extraktumban található vegyületek mennyiségét vékonyrétegikromatogramiról elüálwa az 1. példában leírtak szerint megihatároztuk. Az eredményeket a IV. táblázatban foglaltuk össze. IV. táblázat 3-metoxi-8*14-szeko-l,3,5í(10),w 9(11 )-aszitratetraén-származékok -14,17- -17;/?-ol—14a-ol- -14a-170--idion -14-on -17-on -diol szárma- szárma- szárma- származék zék zék zék Kontroll lombik 20 ."g 340 «g 70 /xg 50 /»g /?-naiftol tartalmú lombik 30 /ig 420 ,«g ny ny ny = kevesebb, mint 4 Mg/ml. Ezután mindkét extraktumot szárazra pároltuk, az olajos maradékot petroléterrel tisztítottuk és kristályosítottuk. A kontroll lombikokból nyert 126 mg anyag (a)o = —28° (c = 1 dioxán) a rétegkromatogram szerint a 17/J-hidroxi-14-oxo származékon kívül 14a-hidroxi-17--oxo származékot is tartalmazott. A /J-naftolt tartalmazó lombikok extraktumából 150 mg 17'/?-4hidroxiÍHl4-oxo származékot nyertünk. (a)D = —38,5° c = 1, dioxán. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás 13/í-rövidszénláncú alkil-3-metoxi-17^-:hidroxi-J8,14-székogonia-l ,3,i5i(il 0) ,9(11 )-tetraén-14-on vegyületek előállítására 13^'-!rövidszénláncú alkil-iS-metoxi-^M^szekogona-l ,3,5(10),9-(ll)-tetraen-14,17-dipon vegyületekből! Saccharomyoes uvarum (MNG 55) süllyesztett levegőztetett és kevertetett tenyészetével, vagy előnyösebben 6 óránkénti azonos térfogatú friss táptalajjal történő hígítással biztosított azonos fejlődési fázisban levő sejtek tenyészetével, vagy az így előállított sejtek vizes szuszpenziójával végzett fermentálás útján, azzal jellemezve, hogy a fermentációt legfeljebb 30 C° hőmérsékleten, előnyösen 20—24 C°-on egy-, vagy kétgyűrűs aromás, poláros szubsztituenst tartalmazó vegyületek jelenlétében folytatjuk le. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy egy-, vagy kétgyűrűs aromás vegyületként fenolt, nasftolt, naiftalinszulfoínsavat, vagy naftilamint használunk célszerűen az alkalmazott szubsztrát koncentrációra számított 5—10%, maximum 20%nyi mennyiségben. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. 7207354. Zrínyi (T) Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21—23. 4
