159553. lajstromszámú szabadalom • Eljárás plazmafehérjék sabil oldatainak előállítására

3 az albumin, valamint az a- és /?-globulinok stabil oldatainak előállítására, a vérplazma és vérszérum fehérjéinek frakcionálása és az albumint, valamint az a- és /?-globulinokat tartalmazó frakciók ezt követő elkülönítése útján, oly módon, hogy kiindulási anyagként vérfestékeket tartalmazó plazmát vagy szérumot használunk és az elkülönített frakciókhoz, legfeljebb 70 C° hőmérsékleten hidrogénperoxidot adunk, míg annak konoentráciája az oldatban a 0,01—0,1%-ot eléri, és az oldatot ezen a hőmérsékleten 2-—10 órán át állni hagyjuk, s ezt követően a denaturált, hőre érzékeny globulino'kat és a vérfestékeket a terméktől elkülönítjük. A találmány szerinti eljárás kivitelezését az alábbi módon végezzük. A kiindulási anyagot, a retroplacentáris és abortszérumot, véradó vérének vagy hulla vérének hemolízált plazmáját és más nyersanyagféleségeket tetszőleges eljárással frakcionáljuk, míg az albumint, a- és /?-globulinokat és vérfestékeket tartalmazó frakciókhoz jutunk. Ezt az elkülönített frakciót a frakcionálószerektől (sók használata esetében) mentesítjük és desztillált vízzel, előnyösen az oldat 6% fehérjekoncentrációjáig hígítjuk. Ezt követően az oldathoz legfeljebb 70 C° hőmérsékleten hidrogénperoxidot adunk, míg ennek végső koncentrációja az oldatban 0,01—0,1% lesz és az oldatot 2—10 órán át fenti hőmérsékleten tartjuk. .. Az oldat melegítése az adott feltételek mellett a hőre érzékeny globulinokra és a vérfestékek fehérje-részére denaturáló hatást fejt ki, ami a globinhak a nemmel alkotott komplexének elrohcsolásához vezet. A hidrogénperoxid a hemet elroncsólja, a vas felszabadul és és három vegyértékűvé oxidálódik. .Melegítéskor a denaturált globulin és vérfestékek csapadék alakjában kiválnak, amit centrifugálással elkülönítünk. Az így kapott fehérje legalább 70% albumint és legalább 30% stabil á- és /?-globulint tartalmaz, vérfestékek nincsenek benne jelen. Az oldat 4,3—4,8% fehérjét és 1%-nál kevesebb alkoholt tartalmaz.; Több fehérjét tartalmazó oldat előállítása céljából: az albumint és a-:

és /?-globulint tartalmazó kiindulási frakció és az oldószer mennyiségi arányát Változtatjuk, Vágy a végtermék koncentrációját tetszés szerinti, ismert módszerekkel növeljük. •.•;•'-.' A találmány szerinti eljárás lehetővé teszi, hogy a plazmafehérjék oldatából tiszta albumint izoláljunk. E célból a vérfestékektől mentesített oldat pH^értékét 4,7—4,8^ra beállítjuk és az oldathoz alkoholt adunk, míg annak koncentrációja a 18%-ot eléri. A kivált csapadékot centrifugálással elkülönítjük, az így kapott 4 szűrlet pH-értékét 5,2-re beállítjuk és 40%-os etanolkoncentráció eléréséig az oldathoz etanolt adunk. Ekkor tiszta albumin válik le, amit az ismert eljárások szerint késztermékké fel-5 dolgozunk. A találmány szerinti eljárás azt is lehetővé teszi, hogy a vérfestékeket és hőre érzékeny globulinokat nem tartalmazó plazmafenérjék !0 stabil oldatait tetszőleges vérfestéktartalmú fehér jeoldatokból állítsuk elő. A plazmafehérjéknek a találmány szerinti eljárással készített stabil oldataiban négyszer 15 kisebb a nátriumklorid-tartalom, mint a véradók szérumából kapott fehérje-oldatokban. Az oldat izotóniáját azokban az esetekben, amikor alacsony nátriumklorid-tartalmú olda-20 tokra van szükség (vérmegbetegedések gyógykezelésénél) glukóz bevitelével biztosítjuk. Azoknak a betegségeknek a gyógykezelésénél, amelyeknél a kloridoknak a szervezetbe való bevitele nincs korlátozva, az oldat izotóniáját 25 a megfelelő mennyiségű nátriumklorid vagy más sók bevitelével biztosítjuk. A találmány szerinti eljárás kiviteli módját közelebbről az alábbi példák szemléltetik. S0 1. példa: A kiindulási anyag nagyobb mennyiségű vérfestéket tartalmazó retroplacentáris szérum. A szérumot 0 C°-ra lehűtjük és 180 ml/liter ki-35 indulási plazma mennyiségben, —15 C°-ra lehűtött, 53%-os etanolt állandó keverés mellett hozzáadunk. A keverékben 8%-os alkoholkoncentrációt létesítünk. Az elegy hőmérséklete eközben —3 C°-ra csökken. Ekkor olvadék és 40 nyálka válik ki. Az elegyet centrifugáljuk, a csapadékot elkülönítjük és a szűrlethez 720 ml/liter kiindulási plazma mennyiségben —15 C°-ra lehűtött 53%-os alkoholt adunk. Az oldat alkoholkoncentrációja 25% lesz, az elegy 45 hőmérséklete —8 C°-ra csökken. A fenti körülményék mellett a y-globulint tartalmazó frakció válik le, amit centrifugálással elkülönítünk. A centrixugálásnál kapott szűrlethez 6,0 pH-érták eléréséig 1 N sósavat adunk s a kép-50 ződő csapadékot centrifugálással elkülönítjük. A szűrlethez 200 ml/liter szűrlet mennyiségben —15 C°-ra lehűtött 96%-os etanolt adunk, míg az oldat alkoholkoncentrációja a 40%-ot eléri. A pH-értéket 1 N HCl hozzáadásával 4,8-ra ál-55 lítjuk be. Az így képződő csapadékot centrifugálással izoláljuk és négyszeres térfogatú, 0,3%) nátriumkaprilátot és 3% glükózt tartalmazó, nem 60 pirogén, desztillált vízben oldjuk. Az oldást intenzív keverés mellett 30—40 perc alatt végezzük. Az így kapott elegyet centrifugáljuk, a csapadékot elkülönítjük és a szűrlethez 7,2 65 pH-érték eléréséig 1 N NaOH-t adunk. 2