159365. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7a, 16a, 17a, 21-tetrahidroxipregn-4-én-3,20-dion-16,17-acetonid és származékai előállítására
5 159365 Forgó rázógépen (percenként 280 fordulat, 5 cm löket) állandó rázás közben 25 C°-on való 24 órai inkubálás után 10—10 ml fermentlevet átviszünk negyven, 250 ml-es Erlenmeyer-lombikban levő 50—50 ml frissen sterilizált B táptalajba. Ezután hozzáadunk l 200 jug/ml szteroidot 0,25 ml steril, 40 mg/ml koncentrációjú N,N-dimetilifonmamidos 16a,17a,21-trihidroxipregn-4-én-3,i20-16,17-aeetonid alakjában. Összesen 400 mg-ot fermentálunk. A fent leírtakkal azonos körülmények között végzett kb. 55 órás fermentálás után a lombikok tartalmát egyesítjük, és a fenmentlevet Seitz-féle szűrőn átszűrjük. A lombikokat, a micéliumot és a szűrőt 100—100 ml meleg vízzel többször átöblítjük. Az egyesített szűredék és mosófolyadékok térfogata 1900 ml. Ezt 3 ízben 600—600 ml kloroformmal extraháljuk, az egyesített szerves kivonatókat vízzel jól kimossuk, és vákuumban bepároljuk. A kapott 267 ml maradékot lemezen krornatografáljuk HF254 kovasavgélen, 1 :4 térfogatarányú kloroform-etilacetát kifejlesztő oldószerrel. Az RF 0,4-nél ultraibolya fényben látható sávot 20% metanolt tartalmazó etilacetáttal eluálva az oldószer elpárol ogtatása után 128 g nemkristályos 7«,16«,17«,21-tetrahidropregn-4^én-3,20-dion-16,17-acetonidot- kapunk. SiMe t cDCi' 9,35 e, I8-CH3), 8,81 (e, 19-CH3 ) 8,84 (e, /?-CH3 , acetonidé), 8,52 (e, «-CH 3 , acetonidé), 6,06 (k, WH ^ 8 cpl, Iß-R), 5,81, 5,32 (ABkv, J = 5,2,0 cps, 21-CH2-), 4,96 (d, J = 4,3, l&ß-H), 4,22 (e, 4-H). (e t= erős. k = közepes, d = =dublet, kv = kvadruplet). 2. példa: 7a,16ff,17«i 21-Tetrahidroxipregn-4-én-3,20-dion-7,21-diacetát-16,17-acetonid 128 g 7a,,16«,17«,21-tetrai hidroxipregn-4-én-3,20-dion-16,17-acetonidnak 3 ml száraz piri-10 15 20 25 30 35 40 dinnel és 1 ml ecetsavanhídriddel készült oldatát 16 órán át szobahőmérsékleten tartjuk, majd jeges vízzel hígítjuk, és kloroformmal extraháljuk. A kloroformos kivonatot sorban 2 n sósavval, 5%-os nátriumhidrogénkarbonát oldattal és vízzel mossuk, majd csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot aceton és hexán elegyéből kikristályosítva 120 mg 7a-16a,17«,21-tetrahidroxipregn-4-és-3,20-dion-7,21--diacetát-16,17-acetonidot kapunk. Olvadáspontja 200-^202 C°; [«]25 D +42,1° (kloroformban). X alk 237 imt (£, 16,780), 2 Nujoi 5)69) 580; 5 j9 g ; 6,20 p., x CDC14 3 9,30 (e, I8-CH3), 8,77 (e, 19-CH 3 ), 8,76 (e, /3-CH3 , acetonidé), 8,53 (e, «-CH 3 , acetonidé), 7,98 (e, 7-OAc), 7,82 (e, 21-OAc), 5,04 (e, 21-CH2 -), 4,29 (e, 4-H). Összetétel: (C28 H,o 8 0 8 , 502,58) számított C 66,91, H 7,62% talált C 67,14, H 7,34% Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás az I általános képletű szteroidok előállítására — ebben a képletben R hidrogénatomot vagy kevés szénatomos acilcsoportot jelent — azzal jellemezve, hogy Thamnidium elegáns mikroorganizmust szén- és energiaforrást és asszimilálható nitrogénforrást tartalmazó táptalajon 16a,17a,21-trihidroxipregn-4-én-3,20-dion-16,17-acetonid jelenlétében aerób körülmények között tenyésztünk, és az így kapott 7a,16«,17a,21-tetrahidroxipregn-4-én-3,20--dion-16,17-acetonidot adott esetben acilozzuk. i2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy mikroorganizmusként Thamnidium elegáns ATCC 18191 törzset használunk. 1 rajz, 2 képlet «. kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. 7207188. Zrínyi (T) Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21—23.
