159347. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hasnyálmirigyek extrahálására
5 159347 6 a közeg pH = 8-ira lúgosítása után végzett szűrés ideje 1/5-e az 5,2-es pH-jú kénsavoldattal végzett extrakciót követő szűrés időigényének. Ha összehasonlítjuk az alkoholos kénsavoldattaíl, és az alkoholos sósavoldattal végzett extrakciót követő, pH = 8 értéken végrehajtott szűrés időigényét, azt tapasztaljuk, hogy 100 g sertés-hasnyálmirigy feldolgozása esetén a szűrés az első esetbai igen rövid időt, kb. 25—60 percet vesz; igénybe, míg a második esetben a szűrés kb. 6 órán át tart. 10 és szűrési nehézség lép fel, mint a megelőző műveletben. A találmány szerinti eljárást az oltalmi kör korlátozása nélkül az alábbi példákban részletesen ismertetjük. A legtöbb példában kiindulási anyagként sertés-hasnyálmirigyet alkalmaztunk. Hangsúlyozzuk, hogy a sertés-hasnyálmirigy pl. a szarvasmarharhasnyálniirigynél sakkal nehezebben dolgozható fel a szokásos extrakciós eljárásokkal, ami többeík között magasabb zsírtartalmának tulajdonítható. Azt találtuk, hogy a találmány szerinti extrakciós lépést követő, pH = 8-oin végrehajtott szűrés idejét tovább csökkenthetjük, kb. arra az értékre, mintha az extrakciót csak alkoholos kónsavioldaittial végeznénk, ha a kénsavas extrakciós műveletet 15 pere helyett- 30 percig, vagy -még hosszabb ideig végeztük. A sósavas extrakciós lépést előnyösen 30 percig, vagy még hosszabb ideig végezzük. Mindeddig azt az esietet vizsgáltuk, amikor a centrifugált hasnyálmiirigy-Mvonat szűrését 8-as pH-értéken hajtjuk végire. Egyes esetekben a szűrést ettől eltérő, 5 és 9 közötti pH-értéken végzik. A találmány szerinti eljárás ezekben is igen előnyösen alkalmazható, mert a savas extrakciós elegy centrifugáihatáságának javulása következtében a szűrési idő jelentősen lecsökken. Egyes esetekben a cenitrifugálással elválasztott hasnyálmirigyet második, sőt harmadik extráikciónak is alávethetjük. Előnyösen járunk el, ha legalább a második extrakciót a találmány szerinti módon hajtjuk végire. Ismeretes, hogy ( azonos kiindulási anyag esetében minden következő extratociónál kevesebb centrifugálási 15 20 25 S0 35 40 1. példa: 200 g őrölt, gondosan homogenizált sertéshasnyáltairigyet 400 ml 81 tórf .'%-os etanolban szuszpendálunk. Az elegy pH-ját a táblázatiban feltüntetett savval a táblázatban megadott értékre állítjuk be. Az első kísérlet kivételével ezután a lépés után az elegy pH-ját 2,,0-ra állítjuk. Az extrakició alatt az elegy hőmérsékletét 10 C°-on tartjuk. Az extrakciót összesen 75 percig végezzük, majd .az elegyhez 5 g szűrést elősegítő anyagot adunk, és az elegyet 10 percig ilOO G értéken centrifugáljuk. Ezután a kivonat pH-ját ammóniával 8nra állítjuk, a kapott elegyhez 5 g szűrést; elősegítő anyagot adunk, és 0 cm átmérőjű szűrőpapíron szűrjük. Az átlátszó szűrlet pH-ját ezután 3^ra állítjuk, és az elegyet térfogatának 1/5-ére bepároljuk. A kapott maradékból eltávolítjuk a zsírt, és a 'maradékot szűrjük. A 'fehérjéket 28%-os nátriumiklariddal kicsapjuk. A csapadékot kiszűrjük, oldjuk, majd ilÓ% nátriumkloriddal ismét kicsapjuk a fehérjéket. A csapadékot összegyűjtjük és feloldjuk, majd a kapott oldatok fehérjetartalmát megmérjük. Az egyes kísérletek körülményeit, és a kapott eredményeket a 2. táblázatban foglaljuk össze. 2. táblázat Sav pH Extrák ció ideje, perc Szűrés ideje, perc , pH = 8-ion levált csapadék térfogata, a nyers kivonat %-ában Biure1>reakció eredménye hasnyál- sósavas mirigy kivonat kg-ként %-ában HCl HCl majd H2S04 H2 S0 4 majd HCl ', H2SO4 majd HCl H2 S0 4 majd HCl H^S04 majd HCl HaSOí majd HCl 2fl 2,5 2,0 5,2 2,0 4,3 2,0 3,7 2,0 3,(3 2,0 3,0 2,0 75 60 15 15 60 15 60 15 60 15 60 15 60 335 335 158 152 84 35 33 36,1 33,3 11,1 10,9 10,8 6,4 7,7 69,38 68,99 71,85 67,93 62,18 67,99 65,03 100 99 103 98 90 98 94
