158957. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pirrolidinkarboxamido-D-galakto-oktopiranozid-tipusú antibiotikumok (linkomicin, celeszticetin) 3-foszfátésztereinek
158957 13 A lmkomicin-3-faszfát jellemzői. 14 2. példa: Infravörös Az ikerionos linkamiein-3-foBzfát spektrum infravörös abszorpciós .spektruma ásványolajban sziuszpendálrwa a következő hulilámlbassziaknál észlelt és reriprok centiméterben kifejezett csúcsoknál mutatkozik: 3330 (S) 1160 (S) 3070 (S) 1092 (S) 2:920 (S) <olaj) 1070 (S) 2850 (S) (olaj) 1048 (S) 2730 (M) 995 (S) 2400 (M) 970 • (S) . 1670 (S) 925 (S) 1565 (S) 877 (S) 1535 (S) 845 (M) 1460 (S) (olaj) 777 (M) 1375 <S) (olaj) 735 ÍM) 1300 (S) 720 (M) 1240 (S) Az ikerionos linkom'iein-3-foszfát infravörös abszorpciós, spektruma, káliumbromiddal taibléttázva, csúcsokat mutat az alábbi, reciprokcentiiméterben kifejezett, hullám hosszaiknál: 3400 (S) 3250 (S) 3070 (S) 2960 (S) 2930 (S) 2870 (S) 1675 CS) 1650 (S) 1620 (S) 1563 (S) 1537 (M) 1460 (M) 1450 (M) 1382 (S) 1320 (S) 1305 (S) 1255 (S) 1180 (iS) 1090 (S) 1070 (S) 1048 (S) 995 (S) 975 (S) 920 (S) 878 (S) 843 (M) 780 (M) 740 (M) 700 (M) Hidrolízis: Emberi szérumban a lmkomicin-3--foszfát szignifikánsan lassabban hidrolizálódilk, mint a lin!komicin~2-Jx)Szfát. Titrélás: Talált egyenértéksúly = 289. Fajlagos foirgatótoépesség: [icc]25 D ,+li27° (c = = 0689 vízben) A líinlköimiein-3-foszfát baktériumellenes aktivitása in vivo CD50 kb. 30 mg/kg (szubfcután adagolás, S.aureus-^szal fertőzött egerelken). Klimimicin-3-foszfát 5 A) Fermentáció A Streptomyces. coelioolor NRRL 3I5Í3I2 törzstenyészetét az 1. példa szerinti módon alkalmazzuk egy sorozat 500 ml-es, Erlennaeyer lom-10 bik beoltására; mindegyik lombik 100 ml-t tartalmaz az alábbi összetételű steril oltótáptalajból: 15 20 25 30 35 40 45 50 Glüikóz-imonoihidrát ,, Phiartmaimediia'' gy apotntagliszt Csapvíz '.'•.•-.' 25 g/liter 25 g/liter q. s. A lombikokat forgó^rázó berendezésiben 28 C°-on 3 napig rázatva tenyésztést Végzünk. A fent leírt módon készült oltóanyagból 5 ml-t használunk egy sorozat 500 ml-es Erlenmeyer lombik minden egyes tagijának beoltására; ezen lombikok 100—400 ml steril fermentációs táptalajt tartalmaznak, anilely a következő alkatrészekből áll: Nátriumnitrát Diiíkáliumfoszfát Magnéziumszulfát Káliumklorid Vasi(II)szulfát Glükóz-imonohidrát Éleszt őki vonat NZ-amin B+ Csiapvíz 3 g/liter 1 g/liter 0,5 g/liter 0,5- g/liter 0,01 g/liter 20,i0 g/liter .2,5 g/liter 5,i0 g/liter 1 l-re +Difco Laboratories cég, Detroit, Michigan A beioiltás után 24 órával 50 mg/liter klinimicint adunk mmdegyik fermentációs lombikba. Fongö-rázó berendezésben 2:8 C°-on 2 napig tenyésztjük a lombikok tartalmát. A foszforilezési reakciót a klinimicin aktivitáscsökkenésének mérésével követjük, a S. lutea 'tesztet használva. A klinimicin-3-foszfát jelenlétét úgy határozzuk meg, hogy az inaktív fer mentlevet alkalikus (pH = 8) foszfátázzal és trisz-pufíenrol inkübáljuk és -a reakcióelegyet S.lutea elleni hátásosiságiria nézve vizsgáljuk. B) Kinyerés A fenti fermentációs folyamatból kapott kb. 12 liter telijies fernientiewet szűrjük, szűrési se-55 gédanyag'ként diatóma-földet használunk. A szűrőliepényt 2 liter vízzel mossuk. A mosóvizet és a tisztára szűrt fermentlevet egyesítjük és az egyesített tiszta fenmentlé-mosóvíz elegyet egy adszorbenssel — mint pl. szénnel vagy gO Amberlite XAD—2-vefl. (Rohm and Haas Co.) — kezeljük a vízben oldható szennyezések eltávolítása céljából, amelyek csökkentenék a következő kromatografálás hatásfokát. Az adszorpciós oszlop készítésének módja: kb. 600 g ad-65 szortbenst (szén vagy Amberlite XAD—2) víz-7
