158918. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kortikoszteroidok mikrobiológiai C-1,2-dehidrogénezése hatásfokának javítására
158918 9 10 goláat 18 órán át folytatjuk. Összesen 5000 g hidrokoriizont adva a rendszerihez, a 24. óráiban az átalakítást leállítjuk, a fcristtalyosan kivált terméket a fermentléből kiszűrjük, 50 liter 1:1 arányú metanol-kloroform elegy/bői átkristályosítjiuk. A kapott termék mennyisége 4200 g, ma,radék hidirokortizon tartlallma 1,8%. 4. példa: A 3. példában leírt ös&zetételő sterilizált .táptalaj 450 literjében Corynebafcterium fascians tenyészetet készítünk. Keverés és levegőztetés mellett az inkubálást 30—35 C°-on addig folytatjuk, míg a táptalajba, adagolt glükóz-mennyiség el nem fogyott. Ekkor 50 litar steril víziben oldott 50 g glükóat és 20 g hfisiztidint, valamint 7 liter aceitonbam oldott 100 g hidrokortizonit adunk a tenyésizetlhez. 3 óra inkufoálás után az indukált tenyészetet 9500 lilüer vízhez adjuk, majd1 80 liter CaCl 2 -os metanolban 8000 g hidrokortizont és 40 g 2^me;tll-l ,4Hnatf tokinont adunlk hozzá. Keverve és levegőztetve, 30—35 C°-on folytatjuk de a dehidirogénezést. Az átalakítás 2. és 4. órájában toválbfoft 2—2 kg hidrokoT-tizonft (adunk a fermentörlba 20—20 liter CaC!l2-os metanolban oldva. Az átalakítás sebességét az első 3 órában végzett kénsavas kromogénmérésen alapuló prednizolon-meghatározás értékeiből Mszjámítjuk, a,z iníkulbálást a számított teljes- átalakulás után V2—1 órával leálltjuk és a f er mentiével a sízokásos módon feldolgozzuk. Átalakítás után a feldolgozásra (kerülő fermentiében a priadhizolon és hidrobortizon koncentrációját Busch szerinti paipírlkromatográfiás módszerrel meghatározva 1,130 mg/ml prednizolont és 0,018 mg/ml átallakulaiüan hidrokortizont találtunk. 5. példa 5 liter sfcerilezett, 1,5% glükózt, 0,2% peptonít, 0,1% kulkoricalekvárt és szervetlen sókat tartalmazó, :(jpH = 6,0) táptalajt beoltunk szilárd tenyészeitről lemiosolit Absidia coerula spóraszuszpenzióval, a tenyésztést keverés és levegőztetés mellett, 20—24 C°-on 36 óra hosszat folytatjuk. A micéliumot leszűrjük és a táptalajjal azonos térfogatú steril vízben (pH = 4,5) szuszpendáljuk. A vízbe felvett micéliumhoz 5,0 g Reichstein féle S vegyületet adunlk 50 ml CaCl^-os metanolban oldva 11-esí 'helyzeitben történő hidiroxilezés céljára. Az átalakítást a Reichsitiéln féle S vegyület elífogyásáig folytatjuk, ezt kénsavas kromogén méréssel állapítjuk meg. Ekkor a rnicéliumot szűréssel eltávolítjuk, a szűrt lé pH-értékét n NaOH oldattal 5,8—6,2-tre állítjuk és1 ia sízűrlétet 30—35 C°-ra melegítjük. A Ha, lljtf-oxi és 11-keto Reichstein S-t tartalmazó oldalihoz 250 ml 3. péida sizierint indukált Corynebactíeriuim simplex tenyészetet adunk. Az átalakításit Jacheres és 35 40 45 50 55 60 levegőztetés mellett folytatjuk le. A 12. óra után vett minta Bush-féle papírkramatográfiás módszerrel vizsgálva a következő eredményt adja: 10 15 20 25 prednizolon epi-^pr edniziol on prednizon hidrokortizon (ll/?-oxi-RS) epi-hidirpkor;tizion ülla-oxi-RS) kortizon (11-keto-RS) 0,520 mg/ml 0,210 mg/ml 0,020 mg/ml nyomokban nyom okban Szabadißlmi igénypontok 1. Eljárás fcortikosizteroidok 1,2-dehidrogénezésiére Corynebacterium fajokkal, a tenyésztést .követő és az átalakítást megelőző enzim-indukció alkallmazásával, azzal jellemjazve, hogy a szteroid 1,2-deíhidrogenáz indukcióját 0,1—0,4 mg/mll: androsztán, vagy pregnán soríbeli szteroid vegyület adagolásával a baktériumok szaporodásának leállása után kezdjük meg, ugyanafckor a táptalaj C és/vagy N forrást biztosító komponensét a tenyészet szaporításaihoz felhasznált mennyiség V5—-Vio részének megfelelő mennyiségiben 'beadagolva másodlagos növekedést idézünk elő, majd a tenyészethez a C-1,2--helyzetiben telített kortikiosizteroidot adagolunk és ennek dehidrogénieziése után a. kapott teríméket kinyerjük. 2. Az 1. igénypont Szerinti eljárás foganatosítási módja azzal, jellemezve, hogy a C és/vagy N forrás beadagolásával egyidőben a tenyésztési anyagcseretermékeket tartalmazó táptalajt Vr>—-Vio térfogatot kitevő vízzel hígítjuk. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatasítási módja, azzial jellemezve, itoogy az indukció megindításakor tápanyagként glükózt adagolunk a közeghez. 4. Az 1. igénypont szerintii eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az indukció megindításakor tápanyagként aiminosavat, célszerűen aszparagint, glutamíint, hisztidiint, vagy glicint adagolunk a közeghez. 5. Az 1. igénypont szerinti eljárás tfogairiatOBÍ-tási módja', azzal jellemezve, hogy az indukció megindításakor tápanyagként szerves sav ammániumsóját, célszerűen amimóiniumlszukcinátot vagy ammóniumeitrátot adagolunk a közeghez. 6. Az 1—4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítáisi mócfja, azzal jellemezve, hogy az átalakítás során hidrogénalkcepitor anyagot, célszerűen :2Hmetil^l,4-maítoík!inonit, viagy.diklóríenolrindofanolt adagolunk a közeghez, 7. Az 1—5. igénypontok bánmélylike szerinti eljárás f oganatosítási imádja, azzal jellemezve, hogy az átalakítandó szteroidot olyan ütemlben adagoljuk, hogy annak mindenkori koncentrációja a érmék kristályos kiválása idején ne lépje túl a vízolidhatóság határértékét. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. 7108587. Zrínyi (T) Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21—23. 5
