158809. lajstromszámú szabadalom • Eljárás krisztályos B12 koenzim és B12 vitamin gyártására

158809 10 Az eluátum (A) hatóanyagtartalmát a 2. példa szerint eljárva cianokobalaminná alakítjuk át és izoláljuk. 954,3 mg Bj2 vitamin kristályt termelünk. Az 5—8 oszlopot a 4. példában leírt módon hasznosítjuk. 4. Az 1. példa szerint járunk el a feltárás végéig. A feltárt léből 25 l-t ismételten elvéve az 1. példában leírtak szerint tisztítjuk az oldatot. Eredményül 33,2 1, összesen 1261 mg korrinoidfeoenzim tartalmú oldatot kapunk, melynek öszszetétele 89,5% B|2

koenzim és 10,5% kísérő korrinoid. A hatóanyagot Wofatit EZ gyantán a következőképpen adszorbeáljuk: 1—4. oszlopként a 3. példában szereplő 5—8. sz. oszlopot vesszük igénybe, 5—8. oszlopként pedig friss gyantaágyat használunk, mélyet az 1. példában leírtak szerint készítünk el. A megkötés és eluálás kivitelezése megegyzik az 1. példában ismertetettel. 10 15 20 fény kizárásával végezzük. — Az oldatból a szilárd anyagokat szűrőprésen választjuk le. A szűrt oldathoz 150 kg kristályos alumíniumszulfát 10%-os oldatát adjuk, majd 10%-os nátriumhidroxid oldattal neutralizálunk. Ismételten szűrünk. A kapott éles oldatot homokszűrőn keresztül az adszorpciós oszlopokon átengedjük. Az adszorpciót 10 db — egyenként 70 cm magas, 30 cm 0-jű és 50 1 gyantát tartalmazó — sorbakötött oszlopon végezzük, lineáris sebesség= 15 m h. A megkötendő oldat 1090 g korrinoidkoenzimet tartalmaz, összetétele 90,7% B|2

koenzim és 9,3% kísérő korrinoid faktor. A megkötés befejeztével az oszlopokat 700 1 ionmentes vízzel átmossuk azonos lineáris sebesség alkalmazása mellett. Az eluálást neutrális kémhatású 50%-os vizes acetonnal végezzük úgy, hogy a 6—5—4— 3—2—1 oszlopokat és a 10—9—8-r-7 oszlopokat kötjük sorba, a megkötéssel tehát ellenáramban eluálunk 2 m/h sebességgel. A következő eluátumokat nyerjük: Eredmények: 25 30 35 25 30 35 Oszlop szám 1—6 .—10 elfolyó oldat Korri- %-os < noidkoenzimB)2 koenzin mg 962,5 97,0 53,3 65,2 65,3 összetétel kísérő korr. 3,0 34,8 kb. 100 Korri-Oszlop noidszám koenzim Bj mg %-os összetétel 2 koenzirr kísérő korr. Megjegyzés 25 30 35 Oszlop szám 1—6 .—10 elfolyó oldat Korri- %-os < noidkoenzimB)2 koenzin mg 962,5 97,0 53,3 65,2 65,3 összetétel kísérő korr. 3,0 34,8 kb. 100 Megjegyzés 1—4 1160 5—8 117,2 elfolyó oldat öö 96,40 3,60 61,40 38,60 kb. 100 (A) (B) 25 30 35 Oszlop szám 1—6 .—10 elfolyó oldat Korri- %-os < noidkoenzimB)2 koenzin mg 962,5 97,0 53,3 65,2 65,3 összetétel kísérő korr. 3,0 34,8 kb. 100 (A) (B) Az 1—4. oszlop eluátumát (A) a 2. példa (A) eluátumánál leírtak szerint, az 5—8. oszlop eluá- 40 tumát (B) az 1. példa (B) eluátumánál leírtak szerint dolgozzuk feL Az (A) eluátumból 920 mg Bi2

vitamint,, a (B) eluátumból 55,4 mg Bi2

vitamint izolálunk. 45 A 2., 3. és 4. példában előállított hatóanyag mennyisége összesen 2820 mg, mely e példákban összesen felhasznált kiindulási anyagra vonatkoztatva 78%-os kitermelést jelent. _. 5. Az 1. példa szerint járunk el a feltárás végéig. A kapott 20 m3

térfogatú, 58,2 gamma/ml korrinoidkoenzim koncentrációjú és 90% B12 koenzimet és 10% kísérő korrinoidokat tartalmazó zagyhoz a szűrés javítása céljából adalékanyagokat adunk. Ezt úgy vitelezzük ki, hogy egyben a biomassza az adszorpciót zavaró N-tartalmú vegyületeket adszorbeálhassa. 250 kg ferriklorid (kristályos) 10%-os vizes oldatát adagoljuk 30 perc alatt erőteljes kevertetés közben. A zagy kémhatása ennek eredményeként kb. 4-re csökken. 10%-os nátriumhidroxid oldat lassú adagolásával a pH-t ezután 6-ra állítjuk be. — A kezelést és a további műveleteket a 60 A 6—1 eluátum (A) térfogata 600 1, bepárlással 200 l-re töményítjük vákuumban és a következőképpen dolgozzuk fel. A vizes oldathoz a térfogatra számított 10% kristályos ammóniumszulfátot adagolunk, kevertetés közben feloldjuk, majd nuccson leszűrjük. A szűrt oldatot kétszer 15 1 fenol-széntetraklorid eleggyel extraháljuk. Ezután absz. aceton segítségével alumíniumoxidra adszorbeáljxik a hatóanyagtartalmat. 50%-os vizes acetonnal leoldjuk és absz. aceton hozzáadásával kristályosítjuk. A feldolgozás során 810 g B12 koenzim kristályt kapunk. Az anyalúgban maradt 122 g korrinoidkoenzimet, melynek összetétele 90,8% B12

koenzim és 9,2% kísérő korrinoid, és az anyalúg térfogata 200 1, egyesítjük a 7—10 oszlopról nyert eluátummal (B), melynek térfogata 300 1. Az egyesített oldathoz 70 g nátriumcianidot adagolunk és fény jelenlétében több órán át kevertetjük, míg a cianoforma létrejön. Ezután vákuumban bepároljuk 100 l-re. A vizes oldathoz 10%-nyi ammóniumszulfátot adagolunk, nuccson szűrjük és 2X10 1 fenol-széntetraklorid eleggyel extraháljuk. Absz. acetonnal alumíniumoxidra csapjuk, majd ezen kromatografáljuk. Az eluciós kromatografálás során a B12 vitamint 50%-os aceton-víz eleggyel oldjuk le és 5