158741. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ciklopeptidek előállítására
158741 (J Az in vitro aktivitást higításos módszerrel határoztuk meg Dubos-iféle közegben. Ilyen körülmények között a termék legkisebb inhibitáló koncentrációja 0,005 és 1 /ig/iml közé esett. Különösen értékesek azok az I általános képletű termékek, amelyek képletében R' adott esetben amino- vagy alkiltiocsoporttal vagy lineáris peptidcsoporttal szubsztituált alkanoilvagy alkenoilcsoportot jelent; az aminocsoportok a fentjelzett módon szubsztituálva lehetnek. Az in vivo aktivitást kísérletileg fertőzött és a, fertőzés utáni naptól 3 hétig kezelt egereken figyeltük meg. A kezeletlen egerek 20—30 nap alatt elpusztulnak. Ilyen körülmények között meghatározhatók a legkisebb hatásos adagok; ezek 50 és 300 mg/kg közé esnek per orális alkalmazás esetén. Különösen értékesek azok az I általános képletű termékek, amelyek képletében R' aminocsoporttal vagy lineáris peptidcsoporttal szubsztituált alkanoilcsoportot jelentenek; az aminocsoportok a fentjelzett módon szubsztituáltak lehetnek. Gyógyászati célra az, új 'vegyületek felhasználhatók akár bázis, akár az alkalmazott adagokban nem-toxikus addíciós sók vagy kvaterner ammóniumsók alakjában. Gyógyászatilag elfogadható addíciós sókként megemlítjük szervetlen savak sóit (mint a hidrokloridok, szulfátok, nitrátok, foszfátok), vagy szerves savak sóit (mint az acetátok, prop ionátok, szukcmátok, benzoátok, fumarátok, maleátok, tartarátok, metánszulfonátok, benzolszulfonátok, teofillinaeetátok, szalicilátok, fenolftalinátok, :metilén-bisz-i/?-oxinaftoátók), vagy ezek szubsztítuciós származékait. Gyógyászatilag elfogadható kvatemer ammóniumsókként megemlíthetjük szervetlen vagy szerves észterek származékait, mint a klór-, bróm- vagy jódmetilátok, -etilátok, -allilátok vagy -benzilátok, metil- vagy etilszulfátok, metánszulfonátok, benzolszulfonátok vagy e vegyületek szubsztítuciós származékai. A következő példák szemléltetik az eljárás gyakorlati végrehajtását anélkül, hogy a t-.lálmány terjedelmét ezekre kívánnánk korlátozni. A termékek Rf értékeit vékonyréteges kromaíográfiával határoztuk meg kovasavgélen. 1. példa: H-A-ciklopeptid előállítása pott oldatot felöntjük egy 2 kg kovasavgélt tartalmazó 11 om átmérőjű oszlopra. Az eiuálást ugyanezzel az oldószerrel végezzük. 640 ml-es frakciókat gyűjtünk. A 10—16. frakciók-5 ban 123,3 g kramatográfiailag tiszta H-A-ciklopeptidet kapunk :95,5% hozammal. •Rf = 0,95 (kovasavgél; 1,2-diklór-etán — metanol 65 : 35 térfogatarányban), {a]22D = _6:2° (c = 0,5, metanolban). 10 2. példa: 3,315 g H-A-ciklopeptidet feloldunk 70 ml etilacetátban. Hozzáadunk .1,13 g Nw:-acetil-Nc-ben-15 ziloxikarbonil-L-lizint. 'A keveréket jégfürdőben, lehűtjük, és hozzáadunk 0,8 g diciklohexilkarbodiimidet. Ezután kívülről jégfürdővel hűtve 2 óra hosszat keverjük, majd éjjelen át 20 C°-on keverjük. Ezután 5 csepp jégecetet adunk hoz-20 zá, majd leszűrjük a keletkezett oldhatatlan részről. A csapadékot etilacetáttal mossuk, a szerves fázisokat egyesítjük, 'majd 25 torr nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot feloldjuk 10 ml etilacetátban, és a kapott oldatot 25 sorban :2%-os nátriuimhidrogéhkarbonát-oldattal, n sósavval és desztillált vízzel mossuk. A szerves fázist vízmentes nátriumszulfáton megszárítjuk, majd szűrjük. A szűredéket 25 torr nyomáson szárazra pároljuk. A kapott 3,14 g nyers terméket felvisszuk egy 75 g kovasavgélt tartalmazó 3 cm átmérőjű. oszlopra. Sorban 30 ml benzollal, 60 ml 9:1 térfogatarányú és 150 ml 5 : 5 térfogatarányú 35 benzol-etilacetát eleggyel, 150 ml etilaoetáttal, 60 ml 90 : 10 tériogatarányú és 210 ml 75 : 25 1 érfogatarányú etilacetát-metanol eleggyel eluáiunk. Az etilacetáttal és a 90 : 10 térfogatarányú etilacetát-metanol elegyekkel eluált frak,Q ciókat egyesítjük, és 25 torr nyomáson koncentráljuk. Ily módon 2,13 g (Na-acetil-Ns-benziloxikarbonil-L-lizil)-A-ciklopeptidet kapunk 48,5% ho-45 50 55 Az 1 393 208 számú francia szabadalom szerint előállított ISO g antibiotikus pepiidet feloldunk 1320 ml 4,5 n metanolos hidrogénkloridban. Az oldatot 2 óra hosszat 20 C°-on ke- „„ verjük, majd 25 torr nyomáson bepároljuk. A maradékot 2 ízben 250—250 ml metanollal extraháljuk. A kivonatokat bepárolva amorf maradékot kapunk, ezt feloldjuk kloroform és metanol 95 : 5 térfogatarányú elegyében. A ka- 65 Összetétel: elméleti: N 12,20%; talált: N 12,43%. [r/ ]2o D = _;67,6° (c = 0,5, metanolban). Rf = 0,73 (kovasavgél; 1,2-diklór-etán — metanol 8 : 2 tél-fogatarány). Ugyanígy eljárva, a megfelelő kiindulási anyagokat használva, előállítjuk a következő vegyületeket: (N-benzil-N-metil-LHvalil)-A-ciklopeptid. Összetétel: elméleti: C 64,30%, H «,67% talált: C 64,13%, H 8,53% Rf = 0,67 (kovasavgél; 1,2-diklór-etán — metanol 8 : 2 térfogatarány). 4
