158499. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy ciklopeptid előállítására
3 158499 4 ves savak (trifluorecetsav) alkalmasak különféle koncentrációkban, de előnyösen 1—6 n sósavat használunk. Az átalakítani kívánt termék koncentrációja a reakcióközegfben 1 és 20% között változhat. A hidrolízist 0 és 50 C° között hajtjuk végre, és a reakcióidő, amely a hőmérséklet függvénye, ,5 óra és 1 óra között változhat. Általában 20 C°-on dolgozunk 2 óra hosszat. Á találmány szerint készült termék adott esetben a szokásos fizikai vagy kémiai módszerekkel, pl. kromatografálással tisztítható. Az addíciós sók az új vegyületnek alkalmas oldószerben savval való reagáltatásával állíthatók elő. Általában a bázist elméleti mennyiségű sav hozzáadásával,víziben oldjuk, és az így kapott oldatot lio'filizáljük. Az új termék bázis vagy addíciós sói alakjában értékes terápiai tulajdonságokkal rendelkezik, nevezetesen olyan antibiotikum, amelynek erős antitutaerkulotikus hatása és Grampozitív és Gram-negatív baktériumok elleni hatása van. Jó eredményeket mutatott mint antituberkulotikum in vitro és in vivo próbákban. Megakadályozza a virulens tüberkulozishaicillusok szaporodását (emberi törzsek, például H;vRv>, szarvasmarhatörzs és ezek különféle rezisztens mutánsai). Az in vitro aktivitást hígításos módszerrel határoztuk meg Dubos-közegben. Ilyen körülmények között a termék minimális imhibitiv koncentrációja 0,005 és 1 «g/ml között van. Az in vivo aktivitást kísérletileg fertőzött és a fertőzés utáni naptól kezdve 3 hétig kezelt egereken határoztuk meg. A kezeletlen egerek 10 15 20 25 30 35 20—30 nap alatt elpusztultak. Ilyen körülmények között meghatározva a legkisebb hatásos adag peroirálisan 50—300 mg/kg testsúly. Az új antibiotikum toxieitása csekély; az egerek 50%-ának elhalását okozó perorális adag (DL50 ) klb. 2,'6 g/kg testsúly. Az új termék felhasználható antibiotikus és antituberkulotikus hatású származékok előállítására is. A következő példában szemléltetjük a találmány szerinti eljárás gyakorlati végrehajtását a találmány korlátozása nélkül. A példában az Rf értéket kovasavgélen végzett vékonyréteges kromatografálással határoztuk meg. Példa: Az 1 393 208 számú francia szabadalom leírásában ismertetett módon kapott 150 g antibiotikus ~ pepiidet feloldunk 1320 ml 4,5 n metanolos hidrogénkloridban. A reafcciókeveréket 2 óra hosszat 20 C°-on keverjük, majd 25 torr nyomáson bepároljuk, a maradékot 2 ízben 250—250 ml metanollal extraháljuk. A metanolos kivonatot bepárolva amorf maradékot kapunk, azt 95:5 térfogatarányú kloroform-metanol elegyiben oldjuk. Az oldatot felöntjük egy 2 kg kovasavgélt tartalmazó 11 cm átmérőjű oszlopra. Az eluálást ugyanazzal az oldószerrel végezzük. 640 ml^es frakciókat gyűjtünk. A 10—16. frakcióban 123,3 g I képletű ciklopeptidet kapunk kromatográfiailag tiszta alakban 95,5% hozammal. Rf = 0,55 (kovasavgélen; 65:35 térfogatarányú diklóretán-metanol elegy). (a)20 D = —62 C° (c = 0,5, metanolban). Szabadalmi igénypont: Eljárás a CH3 H ;— N-CO—MeThr—Leu—MePro—Leu—MeVal 1 Gly— MeLeu—Pro 1 képletű ciklopeptid előállítására bázis vagy savaddieiós sója alakjában —- ebben a képletben MePro L-4-transz-metil-prolint, MeThr L-N-metiltreonint, MeVal L-N-metilvalint, MeLeu D-N-metilleucint, Pro L-prolint, Gly glikokollt, Leu L-leucint jelent — azzal jellemezA kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. 71-07520. Zrínyi (T) Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21—23. 2 ve, hogy 11 072 R. P. antibiotikumot szobahőmérsékleten szerves vagy szerves-vizes oldószerben savval kezelünk, majd kívánt esetben az így kapott termieket átalakítjuk savaddiciós sójává vagy az I képletű bázissá.
