158344. lajstromszámú szabadalom • Eljárás W847-antibiotikumok előállítására

158344 11 12 lopra rávisszük a maradék W847 antibiotikum komplexét (a 'Q és C2 frakciók eltávolítása után) metilénkloridban oldva, és fokozatosan kifejlesztjük egy visszatartott térfogatnyi (az az oldatmennyiség, amelyet az abszorbens viszsza képes tartani) hexánnal, egy visszatartott térfogatnyi etiléterrel, vagy visszatartott térfogatnyi etilacetáttal, majd növekvő mennyiségű acetont tartalmazó etilacetáttal. Az elválasztást ellenőrizzük, a frakciókat S. aureus-szal és E. colival szemben lemezen kipróbálva, majd vékonyréteges kromatográfiával az előbb leírt módon kezelve. Ezzel az eljárással szétválasztható az A és B frakció. Ezeket piszkosfehér porokként különíthetjük el az egyesített kromatografált frakciók szárazra párolásával. Az A és B frakció litere a Sarcina lutea próba szerint 145 jug/mg, illetve 71 /Ag/mg-nek felelt meg. 4. A W847 antibiotikum A, B, C, és C2 frakcióinak kémiai jellemzése. A találmány szerinti antibiotikumok nitrogéntartalmú bázisok, ennélfogva valamennyi frakció,savaddiciós sókat tud képezni a W847— —C antibiotikum-komplexhez hasonlóan. Jellemző ilyen sók a hidrokloridok, szulfátok, fosafátok, sztearátok, propionátok, tartarátok, maleinátiik és hasonlók. Mint várható, ezek a sók a szabad antibiotikumhoz hasonló antibiotikus aktivitást mutatnak, de hatóerejükben és oldhatóságukban különböznek egymástól. A találmány szerinti antibiotikumok hidroxilcsoportot is tartalmazó vegyületek, ennélfogva észtereket képesek alkotni elsősorban karbonsavakkal. Ilyen észterek például az acetátok, propionátok, szukeinátok, benzoátok, ciklopropilkarbonsav-észterek és hasonlók. Az ilyen észterek antibiotikus aktivitása hasonló a szabad antibiotikuméhoz, de hatóerejükben és oldhatóságukban különböznek egymástól. Az 5. táblázatban összefoglaltuk a W487 antibiotikum A, B, Ci és C2 frakcióinak kémiai és fizikai tulajdonságait. A W487 antibiotikum A, B, Ci és C2

frakcióinak infravörös spektrumait (1) mikronokban, a hullámszámot (v) cm-1

egységekben tüntettük fel; T az átbocsátási, • A az abszorpciót jelenti. Az antibiotikum-fra'kciók spektrumát ásványolajban (nujol) határoztuk meg, és a főbb szignifikáns abszorpciós csúcsokat a 6. táblázatban adjuk meg a következő jelzésekkel: NE = nagyon erős, E = erős, ME = közepeserős, M = közepes, GY = gyenge, sz = széles, é = éles, v = váll és ov = oldalvonal. A nujolközegnek tulajdonítható csúcsokat ,,N"nel jeleztük. A W847 antibiotikum A, B, Q és C2 frakcióinak jellegzetes mágneses magrezonanciás színképe van, ezeket az 5., 6., 7. és 8. ábrákon mutatjuk be. Ezeket a spektrumokat egy Varian A—60—A spektrométerrel észleltük az egyes frakciók mintáinak deutériumos kloroformos oldatában, (kb. 0,4 ml, koncentráció kb. 20 mg/ /ml). A spektrumokat belső standardként tetrametilszilánban regisztráltuk mg/kg-ban. A W847 antibiotikum A, B, Ci és C2

frakcióinak stabilitása a következő: 2,0 és 6,0 pH között 100 C°-on az A és B frakció aktivitása 30 perc alatt szignifikánsan csökken, ellenben stabilak ugyanilyen körülmények között 7,0 és 10,0 pH között. Ezzel szemben a Q frakció stabil 2,0 és 8,0 között 30 percig 100 C°-on, és labilis ugyanilyen körülmények között 10,0 pH értékénél. A C2 frakció labilis mind sav (pH 2,0), mind lúgos" (10,0 pH) közegben 100 C°-on, de stabil 4,0 és 8,0 pH között 30 percig 100 C°on. 5. A W847. antibiotikum-komplex A, B, Q és C2 frakciói és a W847—C antibiotikum-komplex biológiai tulajdonságai. A) In vitro próbák A W847 antibiotikum-komplexnek, A, B, Cj és C2

frakcióinak és a W847—C antibiotikumkomplexnek széles spektrumú az aktivitása in vitro számos Gram-pozitív és Gram-negatív mikroorganizmussal szemben. Ennélfogva akár komplexként, akár annak frakcióiként felhasználhatók laboratóriumi üvegeszközök sterilizálására, sebészeti műszerek tisztítására és sterilizálására és hasonló célokra. Ugyancsak felhasználhatók ezek az antibiotikumok szappannal és detergensekkel kombinálva élelmiszerek készítésére használt felületek tisztítására és fertőtlenítésére, például konyhákban, éttermekben stb. A W847 antibiotikum-komplex, A, B, Cj és C2

frakciói és a W847—C antibiotikum-komplex in vitro antibakteriális spektrumát tipikus 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 A W847—C antibiotikum frakciók keveréke a fent leírt módon készült etilacetátos koncentrátumból még a következőképpen is elkülöníthető: A maradék aoetonban oldjuk, és erőteljes 25' keverés közben hideg vízbe öntjük. A szuszpenziót szobahőmérsékletre hagyjuk felmelegedni, és megszűrjük. A csapadék W847—Q és W847— —C2 antibiotikumok keverékét tartalmazza, ezt a továbbiakban W847—C antibiotikum-komp- 30 lexnek fogjuk nevezni. Ez ebben az állapotában szabad bázis. A komplex savaddiciós sója könnyen előállítható oly módon, hogy a metanolos oldatot a megfelelő savval közömbösítjük, és a sót etiléter hozzáadásával kicsapjuk. 35 Ha a fent leírt műveletet alkalmazzuk a W847—C antibiotikum-iíomplex kinyerésére, akkor a W847—Á és W847—B antibiotikum frakciókat a vizes szűredékből extraháljuk, majd a kivonat íkoncentrálható, és a maradék a fent 40 leírt módon magnéziumszilikáton kromatografálható. 6